限制性內(nèi)切酶(restriction endonuclease,REases)是一種能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列,并在特定位置切割DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶,簡(jiǎn)稱限制酶。下面讓我們一起來(lái)看看NEB限制性內(nèi)切酶AlwI(R0513S)的產(chǎn)品介紹吧!
NEB限制性內(nèi)切酶AlwI是一種可識(shí)別GGATCNNNN^N_ 序列的限制性內(nèi)切酶,來(lái)源于大腸桿菌菌株,攜帶有克隆自洛菲不動(dòng)桿菌(Acinetobacter lwoffii)(R. Morgan)的 AlwI 基因。NEB酶AlwI 切割產(chǎn)生的 DNA 片段含有單堿基突出的 5′ 末端,它比平末端更難連接。該酶對(duì)dcm甲基化和CpG甲基化不敏感,dam 甲基化阻斷該酶酶切。對(duì)于不能熱失活的酶,NEB建議進(jìn)行柱純化,或脂糖凝膠電泳后切膠回收,或酚/氯仿抽提。
優(yōu)化限制性核酸內(nèi)切酶反應(yīng):
在建立限制性核酸內(nèi)切酶消化物時(shí),需要考慮幾個(gè)關(guān)鍵因素。在正確的反應(yīng)體積中使用適量的DNA、酶和緩沖液組分,可以達(dá)到最佳消化效果。根據(jù)定義,1 單位的限制性內(nèi)切酶將在 60 分鐘內(nèi)在 50 μl 反應(yīng)中wan全消化 1 μg 底物 DNA。這種酶:DNA:反應(yīng)體積比可用作設(shè)計(jì)反應(yīng)的指南。然而,大多數(shù)研究人員遵循列出的“典型"反應(yīng)條件,建議過(guò)度消化 5-10 倍,以克服 DNA 來(lái)源、數(shù)量和純度的可變性。
產(chǎn)品選購(gòu):
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
R0513S | SAlwI | 500 units |
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