全式金B(yǎng)L21(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞（CD601-03）是一種適用于高效外源基因蛋白表達(dá)的宿主菌株。它使用T7 RNA聚合酶作為表達(dá)系統(tǒng)，該酶的表達(dá)受λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動(dòng)子控制。這個(gè)啟動(dòng)子整合到BL21的染色體上。全式金B(yǎng)L21(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞特別適用于非毒性蛋白的表達(dá)需求。它被廣泛應(yīng)用于蛋白表達(dá)領(lǐng)域，可實(shí)現(xiàn)快速、高效地產(chǎn)生大量外源蛋白。
Tans BL21(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒DNA檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率高達(dá)107cfu/μg DNA。使用Control PlasmidI(Amp+)用于檢測(cè)細(xì)胞是否具有表達(dá)功能，表達(dá)蛋白大小為25 kDa. 該菌株可在-70℃保存六個(gè)月，但不適合在液氮中保存。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
全式金B(yǎng)L21(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞（CD601-03）是一種理想的宿主菌株，用于高效表達(dá)外源基因的蛋白。它采用T7 RNA聚合酶作為表達(dá)系統(tǒng)，并由λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動(dòng)子控制T7 RNA聚合酶基因的表達(dá)。這個(gè)啟動(dòng)子整合在BL21染色體上。該菌株非常適合表達(dá)非毒性蛋白。它被廣泛應(yīng)用于T7 RNA聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)領(lǐng)域。
操作方法：
· 取50 ml冰浴上融化的感受態(tài)細(xì)胞，加入目的DNA，輕輕混勻，在冰浴中放置30分鐘。
· 42℃水浴熱激45秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中2分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
· 向每個(gè)離心管中加入500 μ無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃，200rpm培養(yǎng)1小時(shí)使細(xì)菌復(fù)蘇。
· 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求(質(zhì)粒，重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化)，吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于37℃至液體被吸收，倒置平板，37℃過(guò)夜培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)：
· 避免反復(fù)凍融：盡量避免頻繁地凍融細(xì)胞。每次解凍后，盡可能立即進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，而不是將其再次冷凍。
· 避免使用移液槍吹吸：在操作過(guò)程中，盡量避免使用移液槍進(jìn)行強(qiáng)力吸取和排放細(xì)胞。這樣可以減少對(duì)細(xì)胞的機(jī)械壓力和損傷。
· 輕柔操作：在整個(gè)操作過(guò)程中要注意輕柔處理細(xì)胞。避免過(guò)度搖動(dòng)或震蕩細(xì)胞，以防止細(xì)胞破裂或損壞。
產(chǎn)品選購(gòu)：
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
CD601-03 | BL21(DE3) Chemically Competent Cell | 20×100 μl |
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