上次我們分享了IHC未染色或無信號的原因分析,這次讓我們來看看IHC染色不均勻是為什么吧。
一、組織切片制備
解釋:組織切片薄厚不均勻
→建議:更換刀片
二、組織固定
1.解釋:酒精固定不足會產(chǎn)生偽影;
→建議:延長固定時間;嘗試不同的固定液
2.解釋:固定延遲導(dǎo)致抗原擴(kuò)散;
建議:立即固定組織;可以考慮使用交聯(lián)固定劑
三、脫蠟
解釋:脫蠟不wan全
→建議:使用新鮮的二甲苯
四、抗體兼容性
解釋:一抗可能結(jié)合其他抗原上的表位
→建議:從多抗切換至單抗;嘗試不同的單抗
五、透化
解釋:細(xì)胞膜被破壞,膜蛋白丟失
→建議:使用低濃度或更溫和(Tween-20)的透化試劑
六、組織切片狀態(tài)
解釋:組織切片未保持濕潤
→建議:在染色階段避免組織切片干燥
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