不知道大家是否會(huì)遇到細(xì)胞凍存的時(shí)候狀態(tài)非常不錯(cuò)，結(jié)果等到需要用到該細(xì)胞的時(shí)候怎么也復(fù)蘇不起來(lái)的情況?。炕蛟S可能是凍存細(xì)胞的時(shí)候出現(xiàn)了什么差錯(cuò)？
一.細(xì)胞凍存的原則：慢凍，細(xì)胞在冷凍過(guò)程中，如果降溫過(guò)快，會(huì)形成大的冰晶，這些冰晶會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
詳細(xì)版本見(jiàn)《細(xì)胞凍存的原理是什么？》
二.凍存液的配置：
常用配置比例：培養(yǎng)基:血清:DMSO=7:2:1
適用于大多數(shù)細(xì)胞系，能夠保證細(xì)胞在凍存過(guò)程中有較高的存活率。
血清:DMSO=9:1
適用范圍：適用于需要長(zhǎng)時(shí)間保存或者具有特別珍貴性的細(xì)胞系。血清含量高，可以更好地保護(hù)細(xì)胞，并確保其在凍存后依然保持較好的生物學(xué)特性。
無(wú)血清凍存液：適用于某些對(duì)血清敏感或需要避免血清成分的細(xì)胞系。配置比例：如10% DMSO+90%專用無(wú)血清培養(yǎng)基，或其他適合細(xì)胞生長(zhǎng)的無(wú)血清替代品。
凍存注意事項(xiàng)?。?！
詳細(xì)版本見(jiàn)《細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)》
1.不要將DMSO直接加入含有細(xì)胞的培養(yǎng)基中，因?yàn)镈MSO溶于培養(yǎng)基時(shí)會(huì)釋放大量熱量，可能燙傷細(xì)胞。在加入細(xì)胞前，可以將配置好的凍存液放于4℃進(jìn)行預(yù)冷（預(yù)冷步驟并非必需)。DMSO在4°C時(shí)毒性會(huì)大大減弱，且滲透速度加快，有助于保護(hù)細(xì)胞。
2.若使用凍存盒進(jìn)行凍存，必須將凍存盒解凍至室溫（避免溫度驟變對(duì)細(xì)胞的損傷：如果直接將冷凍的凍存盒從低溫環(huán)境取出，并立即打開(kāi)或處理，細(xì)胞會(huì)受到溫度驟變的影響。
溫度的急劇上升可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成或擴(kuò)大，對(duì)細(xì)胞膜和細(xì)胞器造成機(jī)械性損傷，進(jìn)而影響細(xì)胞的存活率。)
3.把握細(xì)胞凍存的密度：應(yīng)確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，形態(tài)正常，無(wú)污染，且細(xì)胞密度足夠大，因?yàn)閮龃婧蛷?fù)蘇的過(guò)程中不可避免會(huì)導(dǎo)致部分細(xì)胞死亡。
細(xì)胞凍存的步驟：
詳細(xì)版本見(jiàn)《細(xì)胞凍存的實(shí)驗(yàn)步驟》
1.配置好細(xì)胞凍存液，置于4℃預(yù)冷備用
2.將待凍存的細(xì)胞從培養(yǎng)箱中取出，棄去舊的培養(yǎng)基，PBS洗滌，對(duì)于貼壁細(xì)胞，加入適量胰酶消化液，將培養(yǎng)皿放入37℃培養(yǎng)箱中消化數(shù)分鐘（消化時(shí)間根據(jù)細(xì)胞類型而定）當(dāng)觀察到細(xì)胞大塊大塊地從皿底脫落時(shí)，加入等體積的wan全培養(yǎng)基終止消化。離心收集細(xì)胞；對(duì)于懸浮細(xì)胞直接離心收集
3.向離心管中加入適量的凍存液，用移液器輕輕吹打細(xì)胞沉淀，使細(xì)胞均勻懸浮于凍存液中。
4.將重懸后的細(xì)胞懸液分裝至無(wú)菌凍存管中，凍存管放入-80過(guò)夜，次日轉(zhuǎn)移置液氮保存。
天津益元利康生物科技有限公司：
一、輻射五大服務(wù)方向：
1.國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷(xiāo)代理；
2.國(guó)外試劑訂購(gòu)（直訂，或境外代理）；
3.基因組測(cè)序（二代，二代+三代）；
4.基因分型（SNP檢測(cè)）：低/中/中 高通量項(xiàng)目；
5.生物樣本運(yùn)輸（國(guó)內(nèi)、）；
二、多家代理品牌，涉及30多種較有名品牌，經(jīng)營(yíng)代理500多個(gè)品牌：
Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix、International Humic、biocytex、Toxin Technology 、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、R&D、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、Novocastra stemrd、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、zimmerpeacocktech、horizondiscovery、Reagents、megazyme、elisasystems………
所有生物試劑耗材都可以進(jìn)口，特別是冷門(mén)品牌，均能給客戶購(gòu)買(mǎi)到。價(jià)格優(yōu)，貨期短，可加急，快10天到貨；保證服務(wù)質(zhì)量，所有產(chǎn)品均提供售后服務(wù)。大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù)，
公司自成立依靠過(guò)硬的服務(wù)和良好的信譽(yù)與各大企事業(yè)單位、科研單位建立長(zhǎng)期合作?？蛻舭ū贝螅迦A，地大，中科院各所，各大藥企等等。
專業(yè)訂購(gòu)國(guó)內(nèi)外試劑耗材，常備現(xiàn)貨，一手貨源，歡迎合作。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
4
立即詢價(jià)
您提交后，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)