核心組分
胰蛋白酶：切割賴氨酸/精氨酸羧基端肽鍵（最適pH 7-8）
胰淀粉酶：水解多糖α-1,4糖苷鍵（輔助消化細胞外基質(zhì)）
膠原酶（部分配方含）：特異性分解膠原蛋白（增強組織解離）
作用機制
細胞間連接破壞鈣離子螯合劑增強效果細胞外基質(zhì)降解單細胞懸浮
注：0.25%胰酶-EDTA溶液為通用型消化液
| 實驗目的 | 推薦濃度 | 處理時間 | 適用細胞類型 |
|---|---|---|---|
| 常規(guī)傳代 | 0.05%-0.1% | 3-5分鐘 | HEK293、Hela |
| 原代細胞分離 | 0.25% | 15-30分鐘 | 肝細胞、神經(jīng)元 |
| 組織塊消化 | 0.1%+膠原酶 | 1-2小時（37℃） | 腫瘤組織、皮膚活檢 |
預處理
PBS清洗2次（ce底去除血清抑制物）
消化液預熱至37℃（酶活性提升30%）
消化控制
加入消化液體積：覆蓋培養(yǎng)皿表面（例：6孔板加1mL/孔）
顯微鏡下觀察：細胞間隙擴大→邊緣卷曲（立即終止）
終止方法
含血清培養(yǎng)基中和（體積≥3倍消化液）
離心參數(shù)：1000rpm ×5分鐘（保留細胞活性）
| 檢測指標 | 標準要求 | 檢測方法 |
|---|---|---|
| 酶活力 | ≥250 USP units/mg | N-苯甲酰-L-精氨酸檢測法 |
| 微生物 | 無菌檢測陰性 | 膜過濾培養(yǎng)法 |
| 內(nèi)毒素 | ＜0.1 EU/mL | 鱟試劑法（LAL） |
消化不wan全：
→ 增加鈣離子濃度（添加1mM CaCl?）
→ 改用含膠原酶的復合消化液
細胞損傷嚴重：
→ 縮短消化時間至1-2分鐘（分階段觀察）
→ 采用低濃度胰酶（0.02%）持續(xù)震蕩消化
支原體污染風險：
→ 選擇γ射線滅菌產(chǎn)品（非濾過除菌）
→ 操作全程在生物安全柜中進行
無動物源胰酶：
重組酶技術(shù)（避免病毒污染風險）
植物源替代品（適用于敏感細胞系）
智能溫控消化系統(tǒng)：
溫度感應自動終止（精度±0.5℃）
集成式細胞計數(shù)功能（實時監(jiān)控消化進程）
定向修飾酶：
基因工程改造酶切位點特異性（減少細胞表面受體損傷）
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