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目錄:北京蘭博利德商貿(mào)有限公司>>蛋白研究>>IP/CoIP>> GNA-500-10KGFP-Nanoab-Agarose

GFP-Nanoab-Agarose
  • GFP-Nanoab-Agarose
參考價30000
具體成交價以合同協(xié)議為準

參考價:¥ 30000

具體成交價以合同協(xié)議為準
  • LABLEAD 品牌
  • GNA-500-10K 型號
  • 代理商 廠商性質(zhì)
  • 北京市 所在地
規(guī)格

500T

屬性

供貨周期:現(xiàn)貨 貨號:GNA-500-10K

>
規(guī)格
500T30000元999支可售

更新時間:2024-12-09 12:46:37瀏覽次數(shù):291評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 貨號 GNA-500-10K
GFP-Nanoab-Agarose偶聯(lián)anti-GFP納米抗體的瓊脂糖珠子用于免疫沉淀GFP融合蛋白。

GFP-Nanoab-Agarose


貨號:GNA-25-500/GNA-50-1000/GNA-500-10K

儲存條件:可在4℃保存1年,或在-80℃長期保存,避免反復凍融。

產(chǎn)品描述

偶聯(lián)anti-GFP納米抗體的瓊脂糖珠子用于免疫沉淀GFP融合蛋白。

產(chǎn)品優(yōu)勢

沒有普通抗體的輕鏈和重鏈;

高親和力:解離常數(shù)達到pM級別;

高載量:10μl的slurry可以結(jié)合2-4μg GFP蛋白;

較短的孵育時間,結(jié)合5-30min即可;

應用范圍

可用于免疫沉淀(IP)/免疫共沉淀(CoIP)、染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)/RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)、酶活性測定、質(zhì)譜分析等;

特異性

可以結(jié)合GFP、EGFP、YFP和EYFP等。

產(chǎn)品特性

存儲緩沖液:PBS(含有20%乙醇)。

實驗步驟:

收集細胞:

每個免疫沉淀反應大約使用 106-107 個表達綠色熒光蛋白融合蛋白的細胞,可根據(jù)綠色熒光蛋白融合蛋白表達量適當調(diào)整細胞數(shù)。吸出培養(yǎng)基,向培養(yǎng)皿中加入預冷的1×PBS,漂洗2次,利用細胞刮或yi酶消化收集貼壁細胞,細胞轉(zhuǎn)移到離心管,500g離心3分鐘并丟棄上清液。

植物組織裂解處理:

取適量植物組織樣本(葉片等)放置于冷凍液氮中,之后將冷凍后得植物組織樣本放于研缽進行研磨,盡可能充分研磨破壞其細胞壁。加入500-1000ul RIPA 裂解液(需加蛋白酶抑制劑)進行裂解,為了提高裂解效率,可加入200ul 玻璃粉充分震蕩 30min,裂解完成后12000 rpm,離心30min,吸取上清置新的離心管中,棄去沉淀。

動物細胞裂解:

1.在裂解緩沖液中加入蛋白酶抑制劑,用500μl預冷的裂解緩沖液重懸細胞。

2.置于冰上30分鐘,可每10分鐘充分吹打一次。

3.4℃,20,000g離心15分鐘,將裂解產(chǎn)物(上清)轉(zhuǎn)移到一個新的預冷管中,丟棄沉淀。注意:此時細胞裂解產(chǎn)物可長期保存于-80℃。

平衡珠子:

4.振蕩充分混勻GFP-Nanoab-Agarose, 吸取20μl該產(chǎn)品到500 μl預冷的裂解緩沖液中,4℃,2,500g離心2分鐘,丟棄上清液。(此步驟可選)  

結(jié)合蛋白

5.將平衡好的GFP-Nanoab-Agarose加入到細胞裂解產(chǎn)物中(如果未做第4步,可在細胞裂解產(chǎn)物中直接加入20μl該產(chǎn)品),于4℃旋轉(zhuǎn)混合結(jié)合5-30min。如果需要,留存50μl的裂解產(chǎn)物進行免疫印跡分析。
6.4℃,2,500g離心2分鐘,丟棄上清液。如果需要,留存50μl上清液進行免疫印跡分析。

清洗珠子:

7.用500μl預冷的裂解緩沖液中重懸6中的GFP-Nanoab-Agarose,4℃,2,500g條件下離心2分鐘,丟棄上清液并重復洗滌2次。

洗脫蛋白:

方法一:
8.加入20μl 2×SDS-sample buffer重懸GFP-Nanoab-Agarose。95℃,加熱10min,2,500g離心2分鐘收集上清,收集的產(chǎn)物可進行SDS-PAGE及免疫印跡分析。

方法二:
9.替代步驟8的可選步驟:加入50μl 0.2 M pH2.5的gan氨酸洗脫結(jié)合的蛋白,孵育時間30秒,期間不斷混勻,2,500g離心2分鐘收集上清,為了中和酸性的gan氨酸,需加入5μl 1.0 M Tris(pH10.4)。注意:為了提高洗脫效率可以重復這一步。

可選方案

方案一:
如需進行GFP融合酶的活性檢測,無需洗脫,可以直接檢測。
方案二:
如需進行染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)實驗,主要用于含有GFP融合蛋白的蛋白質(zhì)/DNA相互作用的實驗。染色質(zhì)免疫沉淀一般包括細胞固定,染色質(zhì)斷裂,染色質(zhì)免疫沉淀,交聯(lián)反應的逆轉(zhuǎn),DNA的純化以及DNA的鑒定。其中前期細胞固定,染色質(zhì)斷裂不變;然后接著直接進入說明書的第5步,加入細胞裂解產(chǎn)物后,DNA-蛋白質(zhì)復合物結(jié)合到GFP-Nanoab-Agarose上;
進入第6和7步,分離得到復合物;進入第10步,得到洗脫的復合物;后期交聯(lián)反應的逆轉(zhuǎn),DNA的純化及DNA的鑒定等同于普通的ChIP實驗。RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗步驟同上。
方案三:
GFP-Nanoab-Agarose 不僅可以用于在體內(nèi)外檢測和驗證蛋白質(zhì)之間的相互作用, 也可以結(jié)合質(zhì)譜分析篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白。其操作步驟同免疫沉淀法,得到洗脫的復合物后,然后進行SDS–PAGE分析,用考馬斯亮藍或者銀染的方法染色后,切下未知蛋白的條帶,用質(zhì)譜技術(shù)鑒定未知蛋白。





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