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GFP-Agarose免疫沉淀試劑盒
  • GFP-Agarose免疫沉淀試劑盒
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貨物所在地:北京北京市

更新時(shí)間:2024-10-08 21:00:07

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LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的納米抗體開發(fā)的;納米抗體由傳統(tǒng)抗體的重鏈可變區(qū)(VHH)組成,具有分子量小、親和力高、特異性強(qiáng),且耐酸堿高溫環(huán)境等特點(diǎn);基于納米抗體的優(yōu)點(diǎn),LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀結(jié)果出現(xiàn)輕重鏈污染的現(xiàn)象,并且節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

GFP-Agarose 免疫沉淀試劑盒(PROCAP GFP-Agarose IP/CoIP KIT)


貨號(hào)PGA025、PGA050

存儲(chǔ)條件-20°C保存,GFP-Agarose beads經(jīng)常使用可在4℃保存,-80或-20℃長期保存,避免反復(fù)凍融。

試劑盒組分:

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

GNA-25-500/GNA-50-1000

GFP-Nanoab-Agarose

500ul(25T)/1000ul(50T)

IP001A

裂解液A

30ml

IP001B

裂解液B

30ml

IP001C

漂洗液C

30ml

IP001D

漂洗液D

30ml

IP001E

洗脫液E

3x1ml

產(chǎn)品簡介

   LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的納米抗體開發(fā)的;納米抗體由傳統(tǒng)抗體的重鏈可變區(qū)(VHH)組成,具有分子量小、親和力高、特異性強(qiáng),且耐酸堿高溫環(huán)境等特點(diǎn);基于納米抗體的優(yōu)點(diǎn),LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀結(jié)果出現(xiàn)輕重鏈污染的現(xiàn)象,并且節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)步驟

提示:盡量在4℃進(jìn)行操作,洗脫蛋白方法一除外。

1.植物組織裂解處理:

取適量植物組織樣本(葉片等)放置于冷凍液氮中,之后將冷凍后得植物組織樣本放于研缽進(jìn)行研磨,盡可能充分研磨破壞其細(xì)胞壁。加入500-1000ul 裂解液A或裂解液B(需加入PMSF溶液)進(jìn)行裂解,為了提高裂解效率,可加入 200ul 玻璃粉按照600-800g離心力充分震蕩 30min,裂解完成后 12000 rpm,離心 30min,吸取上清置于新的離心管中,棄去沉淀。(進(jìn)行第3步)

2. 動(dòng)物細(xì)胞

2.1 收集細(xì)胞:

根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求收集適量的細(xì)胞,通常每個(gè)免疫沉淀反應(yīng)大約使用 106-107 個(gè)細(xì)胞。

2.2 裂解細(xì)胞:

根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇使用溶液A或溶液B裂解細(xì)胞。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制劑,用500μl預(yù)冷的溶液A或溶液B重懸細(xì)胞;置于冰上30分鐘,可每10分鐘充分吹打一次;細(xì)胞裂解物4℃,20,000g離心15分鐘,將裂解產(chǎn)物(上清)轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的預(yù)冷管中,丟棄沉淀。

3. 平衡珠子:

振蕩充分混勻珠子, 吸取20μl GFP-Nanoab-Agarose beads到500μl預(yù)冷的溶液A或溶液B中,4℃,2,500g離心2分鐘,丟棄上清液。

4. 結(jié)合蛋白:

將平衡好的beads加入到細(xì)胞裂解產(chǎn)物中,于4℃旋轉(zhuǎn)混合結(jié)合30min-1h。

5. 清洗珠子:

根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇使用溶液C或溶液D清洗beads。4℃,2,500g 離心2分鐘,丟棄上清液。用500μl預(yù)冷的溶液C或溶液D重懸beads,4℃,2,500g條件下離心2分鐘,丟棄上清液并重復(fù)洗滌3次。

6. 洗脫蛋白

方法一:

加入20μl 2×SDS-sample buffer重懸beads。95℃,加熱10min充分變性,2,500g離心2分鐘收集上清,收集的產(chǎn)物可進(jìn)行SDS-PAGE及免疫印跡分析。

方法二:

加入溶液E洗脫結(jié)合的蛋白,孵育時(shí)間30秒,期間不斷混勻,2,500g離心2分鐘收集上清,為了中和酸性的甘氨酸,立即加入5μl 1.0 M Tris(pH10.4)。

注意:為了提高洗脫效率可以重復(fù)這一步。收集的產(chǎn)物可進(jìn)行SDS-PAGE及免疫印跡分析。

注意事項(xiàng):

1、關(guān)于裂解液與裂解液的選擇:

裂解液A為溫和裂解液,裂解液B為強(qiáng)裂解液,請(qǐng)根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)樣本選擇相應(yīng)的裂解液,如:若為胞質(zhì)蛋白可選裂解液A或者A與B混合使用,若為核蛋白則可選擇裂解液B。

漂洗液C和漂洗液D的選擇:(裂解液D為高鹽溶液,可能會(huì)破壞蛋白間較弱的相互作用),兩個(gè)蛋白相互作用強(qiáng),同時(shí)還想減少非特異性結(jié)合,可選D;若兩個(gè)蛋白相互作用弱的優(yōu)先C。

2、為取得好的使用效果,盡量避免過多的反復(fù)凍融??梢赃m當(dāng)分裝后使用。

3、本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。

4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


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