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F0202-20T-反轉(zhuǎn)錄試劑盒
  • F0202-20T-反轉(zhuǎn)錄試劑盒
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貨物所在地:北京北京市

更新時(shí)間:2024-11-19 21:00:07

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反轉(zhuǎn)錄試劑盒All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix是一款高效、便捷、減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA合成試劑盒,包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反應(yīng)Buffer、RNA酶抑制劑、dNTPs, Oligo(dT)20VN和隨機(jī)引物等一鏈cDNA合成所需的所有組分,僅需加入RNA模板和水即可開始反應(yīng)。

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)

貨號(hào)F0202

儲(chǔ)存條件-20℃

產(chǎn)品組分

規(guī)格

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix

400ul

dsDNase

50ul×2

10×dsDNase Buffer

200ul

Nuclease-Free Water

1ml×2

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix是一款高效、便捷、減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA合成試劑盒,包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反應(yīng)Buffer、RNA酶抑制劑、dNTPs, Oligo(dT)20VN和隨機(jī)引物等一鏈cDNA合成所需的所有組分,僅需加入RNA模板和水即可開始反應(yīng)。使用該逆轉(zhuǎn)錄試劑盒獲得的cDNA,下游可用于qPCR、普通PCR等實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒采用dsDNase高效去除基因組DNA污染,區(qū)別于常規(guī)的DNase l, dsDNase 能夠特異性的消化雙鏈DNA (dsDNA以及DNA與RNA的雜合鏈),并且具有熱敏感性,可在高溫條件下快速不可逆地失活。與傳統(tǒng)使用DNase l去除基因組DNA污染的方法相比,dsDNase無需額外加入EDTA進(jìn)行失活,不僅節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間,而且降低了對(duì)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的抑制。All-in-OneFirst-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)作為升級(jí)后的一鏈cDNA合成試劑盒,15分鐘內(nèi)最長可獲得12 kb cDNA。

可依據(jù)基因組污染嚴(yán)重程度選擇采用去基因組DNA污染與反轉(zhuǎn)錄分開進(jìn)行的操作方法,或者去基因組污染與反轉(zhuǎn)錄一步法進(jìn)行的操作方法。

使用方法:

針對(duì)基因組含量低的RNA樣品(推薦方案)

于冰上配制如下反應(yīng)體系

試劑

使用量

模板 RNAa

50 ng~1ug

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix

4ul

dsDNase

1ul

Nuclease-Free Water

To 20ul

a. 推薦采用試劑盒提取的 RNA 作為模板

② 輕柔吸打混勻,瞬離;

③ 37℃溫育2min,以去除基因組DNA污染;

④ 55℃溫育15 min;

⑤ 反應(yīng)結(jié)束后,85℃溫育5 min以終止反應(yīng);注:若RNA中基因組DNA污染嚴(yán)重,可適當(dāng)延長37℃溫育時(shí)間至5 min。

⑥ 迅速將獲得的 cDNA置于冰上,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);或立即保存于-20°C。

針對(duì)基因組含量高 RNA 樣品

1. 基因組 DNA 污染去除

①于冰上配制如下反應(yīng)體系:

試劑

使用量

模板 RNAa

50 ng~1ug

10x DNase buffer

1ul

dsDNase

1ul

Nuclease-Free Water

To 10ul

a. 推薦采用試劑盒提取的RNA作為模板。

② 輕柔吸打混勻,瞬離;

③ 37°℃溫育2 min,以去除基因組DNA污染;

:若RNA中基因組DNA污染嚴(yán)重,可適當(dāng)延長37℃溫育時(shí)間至5 min。

④ 65℃溫育2 min,使dsDNase失活,冰上放置。

2. 第一鏈cDNA合成

于冰上配制如下反應(yīng)體系

試劑

使用量(實(shí)驗(yàn)組)

“實(shí)驗(yàn) 1"反應(yīng)產(chǎn)物

10 μl

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix

4 μl

Nuclease-Free Water

To 20 μl

② 輕柔吸打混勻,瞬離;

③ 50℃溫育15min;

注:若目標(biāo)RNA不含Poly(A)結(jié)構(gòu),可預(yù)先25℃溫育10min。

④ 反應(yīng)結(jié)束后,85℃溫育5min,以終止反應(yīng);

⑤ 將獲得的 cDNA 溶液置于冰上,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注:cDNA溶液置于-20℃儲(chǔ)存,建議不超過1周;置于-80℃可長期儲(chǔ)存。

注意事項(xiàng)

預(yù)混液中已經(jīng)包含Oligo(dT)20VN和隨機(jī)引物,不僅適用于包含Poly(A)結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA,也適用于不含Poly(A)結(jié)構(gòu)的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板,但不適用于miRNA等小RNA模板。






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