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MG4277-1-5*1ml-基質(zhì)膠hESC驗(yàn)證含酚紅
  • MG4277-1-5*1ml-基質(zhì)膠hESC驗(yàn)證含酚紅
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貨物所在地:北京北京市

更新時(shí)間:2024-12-09 16:54:41

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基質(zhì)膠hESC驗(yàn)證含酚紅
基質(zhì)膠hESC驗(yàn)是從 (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì),含有豐富的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,主要包括層粘連蛋白、膠原IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生長因子。

基底膠在室溫條件下,聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì),模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能,有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化,以及對細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)的研究。

hES/iPS驗(yàn)證基質(zhì)膠

貨號:MG2277、MG4277

存儲條件:-80℃ 保存,避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品簡介

基質(zhì)膠是從Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì),含有豐富的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,主要包括層粘連蛋白、膠原IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生長因子。

基底膠在室溫條件下,聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì),模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能,有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化,以及對細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)的研究?;|(zhì)膠也適用于類器官生長、分化、代謝和毒理學(xué)研究。高濃度的基質(zhì)膠可以用于動(dòng)物體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞包被。

操作方法:

一、薄膠成膠方法:

1. 凍融后,用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀。

2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上,加入濃度為 50μL/cm2。

2 生長面積的基質(zhì)膠。

3. 在 37℃放置 30 分鐘,即可使用。

二、厚膠成膠方法:

1. 凍融后,用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀。

2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴,將培養(yǎng)的細(xì)胞與基質(zhì)膠混合,用移液槍頭使其懸浮于基質(zhì)中。加入濃度為 150-200μL/cm2 生長面積的基質(zhì)膠。

3. 在 37℃放置 30 分鐘,可成膠??梢约尤爰?xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì),也可使細(xì)胞直接生長在膠表面。

三、薄層包被方法:

1. 凍融后,用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀。

2. 根據(jù)使用需要,采用無血清培養(yǎng)基稀釋基質(zhì)膠。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要確定最佳包被濃度。

3. 將稀釋的 基質(zhì)膠包被于所需的培養(yǎng)器皿中,包被量至少覆蓋整個(gè)器皿的生長表面。室溫下孵育 1 小時(shí)。

4. 去除未結(jié)合的基質(zhì)膠,用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗。

四、胚胎干細(xì)胞 ES 和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 ips 培養(yǎng)

1. 在冰上解融一份分裝的基質(zhì)膠。

2. 在50 mL離心管中加入24 mL的預(yù)冷的DMEM/F-12,并且放在冰上。

3. 將解融的基質(zhì)膠按一定稀釋比例(如1:100)加入到預(yù)冷的 DMEM/F-12中(在50 mL離心管中),混勻。

4. 稀釋好的基質(zhì)膠溶液必須立即使用,進(jìn)行培養(yǎng)皿的包被。推薦的包被體積參見下表。

培養(yǎng)皿

稀釋后的基質(zhì)體積

6孔培養(yǎng)板

1 mL/孔

10 mm培養(yǎng)皿

6 mL/培養(yǎng)皿

T-25培養(yǎng)瓶

3 mL/培養(yǎng)瓶

T-75培養(yǎng)瓶

8 mL/培養(yǎng)瓶

5. 輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿,將基質(zhì)膠溶液均勻的覆蓋到培養(yǎng)皿的表面。

注意:如果培養(yǎng)皿的表面沒有被基質(zhì)膠溶液wanquan覆蓋,則不能用于人ES和iPS細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 培養(yǎng)皿使用前至少在室溫(15 - 25°C)孵育1個(gè)小時(shí),不可使基質(zhì)膠蒸發(fā)。

注意:如果不是立即使用,包被好的培養(yǎng)皿必須密封防止基質(zhì)膠溶液的蒸發(fā),包被后可以在2 - 8°C放置一周。在使用之前,至少在室溫(15 - 25°C)中放置30分鐘恢復(fù)到室溫。

7. 輕輕的將培養(yǎng)皿的一側(cè)傾斜,使多余的基質(zhì)膠溶液在一側(cè)的邊緣匯聚。通過移液器或者泵吸取多余的基質(zhì)膠溶液。確保包被的表面沒有被刮到。

8. 立即加入ES細(xì)胞培養(yǎng)基(例如,6孔板每孔2 mL)。


注意事項(xiàng):

1. 收到產(chǎn)品并確認(rèn)到貨情況無異常后,請將基質(zhì)膠儲存于-80℃冰箱,短暫使用可置于-20℃冰箱。切勿將基質(zhì)膠儲存于自動(dòng)除霜的冰箱中。在第一次融化后請分裝保存,應(yīng)避免基質(zhì)膠反復(fù)凍融。

2. 因基質(zhì)膠在10℃以上即可成膠,在操作過程中,保持基質(zhì)膠一直置于冰上,所有接觸的細(xì)胞培養(yǎng)器皿,移液吸頭,分裝管等都必須預(yù)冷后使用。

3. 所有操作均需在無菌環(huán)境下進(jìn)行,試劑瓶瓶蓋可用70%乙醇擦拭,并自然干燥。應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。

4. 溶解時(shí)可將基質(zhì)膠基質(zhì)置于 4℃冰箱內(nèi)冰上過夜溶解。成膠后基質(zhì)膠可以在 4℃ 24-48 小時(shí)后重新呈液態(tài)。







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