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K-604

MCE 國(guó)際站：K-604 dihydrochloride

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-100400A

CAS：217094-32-1

純度：99.42%

存儲(chǔ)條件：4°C，密封保存，遠(yuǎn)離潮濕 *溶劑中：-80°C，2年；-20°C，1年（密封保存，遠(yuǎn)離潮濕）

運(yùn)輸條件：美國(guó)大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產(chǎn)品活性：K-604 dihydrochloride 是一種有效的選擇性?；o酶 A：膽固醇?；D(zhuǎn)移酶 1 (ACAT-1) 抑制劑，IC50 為 0.45±0.06 μM。

生物活性：K-604 dihydrochloride 是一種有效的選擇性酰基輔酶 A：膽固醇?；D(zhuǎn)移酶 1 (ACAT-1) 抑制劑，IC₅₀ 為 0.45± 0.06 微米。 IC50 和目標(biāo)：IC50：0.45±0.06 μM (ACAT-1)，102.85±14.33 μM (ACAT-2)^[1] 體外：/ i> 檢查了 K-604 對(duì)人 ACAT-1 和 ACAT-2 的效力和選擇性。 K-604 對(duì)人 ACAT-1 的 IC₅₀ 值為 0.45 μM，對(duì)人 ACAT-2 的 IC₅₀ 值為 102.85 μM，表明 K-604 對(duì) ACAT-1 的選擇性比對(duì) ACAT-1 的選擇性高 229 倍ACAT-2。動(dòng)力學(xué)分析表明，該抑制作用與油酰輔酶 A 具有競(jìng)爭(zhēng)性，K_i 值為 0.378 μM。 K-604 有效抑制人巨噬細(xì)胞中的膽固醇酯化，IC₅₀ 值為 68 nM^[1]。在無(wú)細(xì)胞生化測(cè)定中，0.5 μM 的 K604 可抑制 ACAT1 酶活性 70%，而不會(huì)顯著抑制 ACAT2 酶活性。為了研究阻斷 ACAT1 是否會(huì)增加神經(jīng)元細(xì)胞的自噬，用 K604 處理 N2a 細(xì)胞。結(jié)果表明，在 0.1 至 1 μM 時(shí)，K604 可抑制 60-80% 的 ACAT 活性。接下來(lái)，將濃度為 0.1 至 1 μM 的 K604 添加到 N2a 細(xì)胞中 24 小時(shí)，并通過(guò)蛋白質(zhì)印跡檢查 LC3 水平。結(jié)果表明，K604 以劑量依賴性方式增加了 LC3-II/LC3-I 比率，這是自噬體形成的可靠標(biāo)記。 K604 處理后，N2a 細(xì)胞中熒光 LC3 斑點(diǎn)的數(shù)量顯著增加。通過(guò)蛋白質(zhì)印跡，K604 顯著降低 N2a 細(xì)胞中 p62 的水平^[2]。 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：使用 F1B 倉(cāng)鼠（一種易受飲食誘導(dǎo)的高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化影響的動(dòng)物模型）評(píng)估 K-604 對(duì)主動(dòng)脈病變區(qū)域和血漿膽固醇水平的影響。 K-604 的施用不影響體重或食物消耗。脂肪喂養(yǎng)倉(cāng)鼠的血漿膽固醇水平比飼料喂養(yǎng)倉(cāng)鼠高約 12 倍，K-604 僅在測(cè)試的最高劑量 (30 mg/kg) 下顯著降低，但在較低劑量下 (1 -10 mg/kg)。油紅 O 染色的脂肪條紋病變由高脂肪飲食顯著誘導(dǎo)，通過(guò)施用 K-604 顯著減少。此外，進(jìn)行動(dòng)脈粥樣硬化病變的組織學(xué)分析。對(duì)照組脂肪條紋病變的特征是泡沫狀巨噬細(xì)胞在內(nèi)皮下空間的聚集。相比之下，K-604^[1] 的施用顯著減少了泡沫狀巨噬細(xì)胞占據(jù)的區(qū)域。

體外：檢查了 K-604 對(duì)人類 ACAT-1 和 ACAT-2 的效力和選擇性。K-604 對(duì)人類 ACAT-1 的 IC50 值為 0.45 μM，對(duì)人類 ACAT-2 的 IC50 值為 102.85 μM，表明 K-604 對(duì) ACAT-1 的選擇性比對(duì) ACAT-2 的選擇性高 229 倍。動(dòng)力學(xué)分析表明，抑制作用與油酰輔酶 A 具有競(jìng)爭(zhēng)性，Ki 值為 0.378 μM。K-604 有效抑制人類巨噬細(xì)胞中的膽固醇酯化，IC50 值為 68 nM[1]。在無(wú)細(xì)胞生化測(cè)定中，0.5 µM 的 K604 可抑制 70% 的 ACAT1 酶活性，而不會(huì)顯著抑制 ACAT2 酶活性。為了研究阻斷 ACAT1 是否會(huì)增加神經(jīng)元細(xì)胞的自噬，用 K604 處理 N2a 細(xì)胞。結(jié)果表明，濃度為0.1至1 µM時(shí)，K604可抑制60-80%的ACAT活性。然后將濃度為0.1至1 µM的K604加入N2a細(xì)胞中，作用24小時(shí)后，用Western blot檢測(cè)LC3水平。結(jié)果表明，K604以劑量依賴性方式增加了LC3-II/LC3-I比率（自噬體形成的可靠標(biāo)志）。K604處理后，N2a細(xì)胞中熒光LC3點(diǎn)的數(shù)量顯著增加。Western blot顯示，K604顯著降低了N2a細(xì)胞中p62的水平[2]。MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

體內(nèi)：使用 F1B 倉(cāng)鼠（一種易患飲食誘發(fā)的高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型）評(píng)估 K-604 對(duì)主動(dòng)脈病變區(qū)域和血漿膽固醇水平的影響。K-604 的給藥不會(huì)影響體重或食物消耗。脂肪喂養(yǎng)的倉(cāng)鼠的血漿膽固醇水平比普通飼料喂養(yǎng)的倉(cāng)鼠高約 12 倍，K-604 僅在最高測(cè)試劑量（30 mg/kg）下顯著降低血漿膽固醇水平，但在較低劑量（1-10 mg/kg）下沒(méi)有降低。高脂飲食顯著誘導(dǎo)油紅 O 染色的脂肪條紋病變，而 K-604 可顯著減少這種病變。此外，還對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化病變進(jìn)行了組織學(xué)分析。對(duì)照組的脂肪條紋病變以內(nèi)皮下空間中泡沫巨噬細(xì)胞的積聚為特征。相反，使用K-604[1]后，泡沫巨噬細(xì)胞所占面積明顯減少。MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：倉(cāng)鼠[1] 8周齡雄性F1B倉(cāng)鼠（n=30）用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物房溫度控制在23±3°C，相對(duì)濕度控制在50±20%。動(dòng)物以CE-2飼料喂養(yǎng)，隨后補(bǔ)充含有0.3%膽固醇和10%椰子油的CE-2，持續(xù)10周。在脂肪負(fù)荷期間，K-604以1、3、10或30 mg/kg/天口服給藥（每個(gè)劑量組n=6）。對(duì)照組（n=6）接受0.5%甲基纖維素水溶液代替K-604。自來(lái)水隨意提供。給藥時(shí)測(cè)量體重。使用市售試劑盒（膽固醇E-Test）采集血液樣本以測(cè)定血漿膽固醇水平。MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 N2a 在含有 10% 胎牛血清 (FBS) 的 DMEM/Opti-MEM (50:50) 中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 37°C，CO2 為 5%，培養(yǎng)箱為加濕培養(yǎng)箱。細(xì)胞與 ACAT1 特異性抑制劑 K604 (0.1、0.5 和 1 µM) 或同種型非特異性 ACAT 抑制劑 CI-1011 一起孵育 24 小時(shí)。從出生后 0-3 天的小鼠腦中分離原代皮質(zhì)神經(jīng)元。皮質(zhì)神經(jīng)元以 350,000 個(gè)細(xì)胞/孔接種在 6 孔板中，并在含有 1×B27、0.5 mM L-谷氨酰胺和 5 ng/mL 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的 2 mL/孔 Neurobasal A 中生長(zhǎng)。每 7 天將一半培養(yǎng)基更換為新鮮培養(yǎng)基。培養(yǎng) 14-21 天后，細(xì)胞用于單獨(dú)實(shí)驗(yàn)[2]。 MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

激酶實(shí)驗(yàn)：ACAT 活性是通過(guò)測(cè)量膽固醇[14C]油酸酯的產(chǎn)生來(lái)確定的。來(lái)自 CHO-ACAT-1 或 CHO-ACAT-2 細(xì)胞的微粒體級(jí)分用 0.5 M KCl、0.5 mM EDTA 和 25 mM Tris-HCl (pH 7.8) (緩沖液 A) 中的 CHAPS 稀釋至最終蛋白質(zhì)濃度為 1.0 mg/mL。將 10 μL 緩沖液 A 中含有 9.2 μg 蛋白質(zhì)（對(duì)于 ACAT-1）或 4.9 μg 蛋白質(zhì)（對(duì)于 ACAT-2）的微粒體部分與 5 μL DMSO 中不同濃度的 K-604（0.4、0.6 和 0.8 μM）或 CI-1011 混合，然后用 152.5 μL 混合膠束重構(gòu)，其中混合膠束含有 1.6 mM 膽固醇、11.2 mM 磷脂酰膽堿和 9.3 mM ?；悄懰幔ㄈ苡?25、0.5 mM EDTA 和 Tris-HCl（pH 7.8））。反應(yīng)開(kāi)始于加入 10 μL 0.45 μM [14C]油酰輔酶 A、10 nM 無(wú)脂肪酸牛血清白蛋白 (無(wú)脂肪酸 BSA) 和 25 mM Tris-HCl (pH 7.8)。反應(yīng)混合物在 37°C 下孵育 25 分鐘，然后加入 150 μL 氯仿/甲醇 (2:1) 終止反應(yīng)。有機(jī)相在氮?dú)饬飨赂稍?。?150 μL 氯仿/甲醇 (2:1) 重新懸浮脂質(zhì)，并使用己烷/乙-醚/乙酸 (75:25:1) 通過(guò)薄層色譜法 (TLC) 進(jìn)行顯影。膽固醇 [14C] 油酸酯的放射性用 BAS 2500 圖像分析儀 [1] 測(cè)定。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

IC50 & Target：ACAT-1 0.45 μM (IC50) ACAT-2 102.85 μM (IC50)

熱-銷產(chǎn)品：Rhodamine Phalloidin  | Fumonisin B1  | Brusatol  | Thymidine  | VD2-d3

Trending products：Recombinant Proteins  |  Bioactive Screening Libraries  |  Natural Products  |  Fluorescent Dye  |  PROTAC  |  Isotope-Labeled Compounds  |  Oligonucleotides

參考文獻(xiàn)：

[1]. Ikenoya M, et al. A selective ACAT-1 inhibitor, K-604, suppresses fatty streak lesions in fat-fed hamsters without affecting plasma cholesterol levels. Atherosclerosis. 2007 Apr;191(2):290-7.
[2]. Shibuya Y, et al. Acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransferase 1 blockage enhances autophagy in the neurons of triple transgenic Alzheimer's disease mouse and reduces human P301L-tau content at the presymptomatic stage. Neurobiol Aging. 2015 Jul;36(7):2248-2259.