化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
一卷膜6000+RMB？！還沒有恢復(fù)實驗應(yīng)該怎么應(yīng)對“膜慌”
閱讀：758 發(fā)布時間：2020-4-9
實驗室小貼士
用在免疫印跡中zui常規(guī)的膜的類型是硝酸纖維素膜（NC 膜）和聚偏氟乙烯（PVDF）膜。兩者主要區(qū)別：
| 產(chǎn)品 | Biotrace NT 膜 | FluoroTrans W PVDF 膜 |
| 推薦貨號 | 66485 | BSP0161 |
| 描述 | 純硝酸纖維素，0.22μm | 聚偏氟乙烯，0.2μm |
| 應(yīng)用 | 蛋白轉(zhuǎn)移 核酸檢測 ELISA | 蛋白轉(zhuǎn)移 蛋白點或條印跡 免疫染色檢測 |
| 優(yōu)勢 | 高靈敏度 低背景 | zui高的靈敏度 低背景 低 burn through 高結(jié)合力 化學(xué)品抗性 高拉伸強度 |
| 結(jié)合反應(yīng) | 疏水和靜電 | 疏水（甲醇浸泡） |
| 固定方法 | Western 轉(zhuǎn)移點或條印跡 烤和紫外交聯(lián)（用于核酸） | Western 轉(zhuǎn)移點或條印跡 |
轉(zhuǎn)印膜的免疫印跡常見問題分析與解決方案
| 問題 | 可能原因 | 解決方案 |
| 沒有陽性條帶或很弱 | 抗體活性低或效價低 | 分裝和在零下 20 度儲存抗體溶液以及避免多次反復(fù)凍融。使用更高濃度的一抗。 |
| 轉(zhuǎn)膜不充分（轉(zhuǎn)膜后通過凝膠染色得到了確認） | 增加轉(zhuǎn)膜的時間。降低轉(zhuǎn)膜緩沖液中甲醇的濃度。 加入 0.1%的 SDS 能夠幫助大蛋白的轉(zhuǎn)膜。 | |
| 低的偶聯(lián)活性 | 確保膠和膜之間沒有氣泡。使用不含 SDS 的轉(zhuǎn)膜緩沖液。如果使用的是 Biotrace NT 膜，則需在轉(zhuǎn)膜緩沖液中加入甲醇 | |
| 封閉劑干擾了抗體的結(jié)合 | 在 4 度儲存偶聯(lián)物。增加偶聯(lián)物的濃度或孵育時間。 | |
| 背景高 | 使用一個不同的封閉劑。 | |
| 抗體和酶偶聯(lián)的效果差 | 顏色反應(yīng)時間太長 | 當(dāng)需要的顏色深度達到之后立即停止反應(yīng) |
| 封閉不* | 使用親和純化的二抗。 | |
| 封閉劑中存在磷酸酶或過氧化物酶的活性 | 增加封閉時間。使用一個不同的封閉劑。 | |
| 背景點狀物 | 緩沖液中存在顆粒 | 試劑使用前用過濾器過濾。 |
| 假陽性或點狀 | 一抗的交叉反應(yīng) | 進一步純化或預(yù)吸附膜抗體。如果條件可以的話使用單抗。降低一抗的濃度。 |
| 樣本中存在磷酸酶或過氧化物酶的活性（通過在檢測中不加一抗和二抗得到確認） | 在封閉前通過 80 度 20 分鐘加熱來失活酶的活性。 |
WB產(chǎn)品線信息
| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| SA7937 | RIPA裂解液(強) | 100ml |
| 37623 | Qproteome FFPE Tissue Kit從福爾馬林固定、石蠟包埋組織中高效抽提全長蛋白 | 1kit |
| PA001 | BCA蛋白定量試劑盒 | 250次/500次/1000次 |
| PA002 | Bradford蛋白定量試劑盒 | 250次/1000次 |
| PA003 | Lowry蛋白定量試劑盒 | 250次/1000次 |
| 180-8210D | LDS Sample Buffer,With Reducing(4×) | 10ml/瓶 |
| 180-6003 | 預(yù)染蛋白Marker | 200ul/支 |
| 180-8001H | SDS梯度預(yù)制膠 4-20% 8X10cm 12 well | 10片/盒 |
| 180-8002 | SDS預(yù)制膠電泳緩沖液 Running Buffer（20X） | 500ml/瓶 |
| 180-1000/1/2 | VE-180 垂直電泳槽(0.75mm/1.0mm/1.5mm) | 套 |
| 180-**** | VE180垂直電泳槽其他配件 | EA |
| 180-7001 | 快速蛋白染液 Fast Protein Stain | 1L |
| BSP0161 | PVDF膜[0.2μm PVDF膜] (PALL) | 26cmx3.3m |
| 66485 | 硝酸纖維素膜[0.22μm] (PALL) | 30cmx3m |
| 8006-6006 | 快速轉(zhuǎn)膜緩沖液（10 X） Fast Transfer Buffer Stock Solution | 500mL |
| 186-1000 | VE-186 轉(zhuǎn)移電泳槽（標(biāo)配） | 套 |
| 586-1000 | VE-586 轉(zhuǎn)移電泳槽（四塊膠，模具成型，含藍冰冰盒）（標(biāo)配） | 套 |
| 386-1000 | VE-386 半干轉(zhuǎn)移電泳槽（標(biāo)配） | 臺 |
| SA7592 | 麗春紅S染色液(10×Ponceau S) | 50ml/10ml |
| SA7588 | Western封閉液 | 100ml |
| SA7589 | Western封閉液(奶粉) | 100ml |
| SA7586 | Western blot一抗稀釋液 | l |
| SA7587 | Western blot二抗稀釋液r | l |
| 21338 | β-actin Antibody | 100ul |
| 21800 | β-Actin Mouse Monoclonal Antibody | 100ul |
| 21612 | GAPDH Antibody | 100ul |
| 44032 | β-Tubulin Monoclonal Antibody(5G3) | 100ul |
| L3032 | Goat anti-Mouse IgG Secondary antibody, HRP conjugated | 1ml |
| L3012 | Goat anti-Rabbit IgG Secondary antibody ,HRP conjugated | 1ml |
| L3042 | Rabbit anti-Goat IgG Secondary antibody,HRP conjugated | 1ml |
| 180-501 | 超靈敏 ECL發(fā)光液 | 50ml+50ml |
| 180-5001 | 超靈敏 ECL發(fā)光液 | 250ml+250ml |
| 010-Q | 1-200µl電泳點樣吸頭，無色透明，袋裝 | 1000/袋，10袋/箱 |
| YW-ST-LW | 一次性乳膠手套，加厚型，L/M/S/XS | 100只/盒，10盒/箱 |
| YW-ST-TNB | 一次性丁腈手套，耐用型，L/M/S/XS | 100只/盒，10盒/箱 |
| YW-ST-GNB | 一次性丁腈手套，透氣型，L/M/S/XS | 100只/盒，10盒/箱 |