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目錄:上海博盛龍生物科技有限公司>>實(shí)驗(yàn)試劑>>抗原與抗體>> HRP標(biāo)記試劑盒

HRP標(biāo)記試劑盒
  • HRP標(biāo)記試劑盒
參考價(jià)1700
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

參考價(jià):¥ 1700

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  • 博奧龍 品牌
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  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 蘇州市 所在地
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供貨周期:一周 規(guī)格:1000μg 貨號:BF06095S-1000

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1700元1000000件可售

更新時(shí)間:2025-03-03 11:11:24瀏覽次數(shù):94評價(jià)

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供貨周期 一周 規(guī)格 1000μg
貨號 BF06095S-1000
HRP標(biāo)記試劑盒采用高碘酸鈉氧化法活化辣根過氧化物酶(HRP)的糖基,經(jīng)過氧化以后活化的HRP 帶有醛基可以與待標(biāo)記物的游離氨基結(jié)合,發(fā)生希夫堿反應(yīng)(Schiff's Base Reaction)。

HRP標(biāo)記試劑盒使用方法:

1.準(zhǔn)備標(biāo)記物:首先去除待標(biāo)記物(蛋白或者抗體)中的疊氮鈉、甘油、氨基物質(zhì)(包括甘氨的酸、Tris等)、EDTA等物質(zhì)??刹捎猛肝龌虺瑸V的方法置換緩沖液,以除去以上物質(zhì),以達(dá)到優(yōu)良標(biāo)記效果。透析緩沖液0.01M CB,PH:9.6 緩沖液(說明書附件有經(jīng)驗(yàn)配方無需調(diào)整PH),若實(shí)驗(yàn)室沒有碳酸鹽試劑再采用0.01M PBS(PH:7.0-7.4均可)透析或超濾置換緩沖液,最后將抗體/蛋白調(diào)整到濃度2mg/ml;如果抗體和蛋白不含上述這些干擾物質(zhì)可以直接用上述PBS或CB緩沖液調(diào)整濃度到2mg/ml備用。對于小分子物質(zhì)不建議直接標(biāo)記HRP,若仍需標(biāo)記,需要自行摸索濃度,保證HRP的比例過量,如果不能確保HRP過量,標(biāo)記完之后最好透析或過濾除去未標(biāo)記的小分子物質(zhì)。

2.以下以標(biāo)記1mg抗體(2mg/ml)為例詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)流程:

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

   從4℃中取出HRP標(biāo)記試劑盒,各組分使用前混勻。

標(biāo)記反應(yīng)

待標(biāo)記抗體 500µl(1mg,2mg/ml),加入預(yù)活化HRP(100ul,1mg,抗體:HRP標(biāo)記質(zhì)量比按照 1:1) 用移液器反復(fù)吹打幾次以充分混勻,混勻后加入HRP標(biāo)記啟動液108ul,(加入啟動液量比例:每10ul(抗體和HRP混合液)加1.8ul啟動液)繼續(xù)混勻數(shù)次,避免產(chǎn)生氣泡。然后避光30℃-37℃溫箱偶聯(lián)反應(yīng)2-3小時(shí),若遇快要下班也可放4℃反應(yīng)24小時(shí)左右(此法效果一樣或者更好不必?fù)?dān)心)。

標(biāo)記反應(yīng)終止

單支標(biāo)記終止液(凍干粉)中加入1ml去離子水配成標(biāo)記終止液,取50ul加入步驟2所述反應(yīng)液中(加入標(biāo)記終止液量比例:每1mg HRP加入終止液50ul),充分混勻,室溫放置1小時(shí)或者4℃ 2小時(shí)。(注:標(biāo)記終止液不穩(wěn)定,不能保存,必須現(xiàn)配現(xiàn)用)

標(biāo)記物產(chǎn)物收集與保存

終止完成后,加入等體積的標(biāo)記物保存液,充分混勻,置于-20℃可以保存一年。如果想更長期的保存建議先用0.067M PBS  PH:7.0(說明書附件有經(jīng)驗(yàn)配方)透析或超濾置換緩沖液后再加標(biāo)記物保存液。這樣可以保存3年左右甚至更長。

反應(yīng)體系摘要:

溶液名稱:待標(biāo)記抗體+活化HRP+標(biāo)記啟動液+標(biāo)記終止液+保存液

溶液體積:  500µl   +  100µl  +    108µl   +  50µl    + 758µl =1516µl

 

注意事項(xiàng):

待標(biāo)記物緩沖液成分過于復(fù)雜以及含有氨基小分子和NAN3的初始緩沖液必須透析或超濾置換掉,請采用0.01M PBS(PH:7.0-7.4均可)或0.01M CB,PH:9.6緩沖液均可。

如果待標(biāo)記物不是抗體是其它蛋白,那么請根據(jù)分子量參考蛋白和酶用量:若分子量在40KD以上建議1mg蛋白使用1mg HRP;如果分子量在30KD左右,建議1mg蛋白使用1.3mg HRP;如果分子量在20KD左右,建議1mg蛋白使用2mg HRP;如果分子量在10KD左右,建議1mg蛋白使用4mg HRP;此時(shí)啟動液和終止液請按步驟2和3描述標(biāo)準(zhǔn)適量加入;如果標(biāo)記量為小于1mg的抗體或蛋白(最小可以0.1mg),HRP和其它試劑加入量按比例折算即可。

小分子藥物不建議直接標(biāo)記HRP,因?yàn)镠RP的結(jié)構(gòu)不能結(jié)合足夠的藥物會造成效價(jià)偏低,這種情況建議先偶聯(lián)BSA增加小分子偶聯(lián)量再進(jìn)行HRP標(biāo)記,這樣效果會非常好。

如果待標(biāo)記物含有其它蛋白需要把無關(guān)蛋白同樣計(jì)算進(jìn)去,盡快如此也請您慎重選擇這樣的樣品進(jìn)行標(biāo)記。

本試劑盒保存4℃可以保證1年內(nèi)開啟有效,活化HRP開啟后小心取用切勿污染堿性物質(zhì)。

終止液干粉5000ug規(guī)格5支/1000ug規(guī)格2支,原則上每一支配好后僅限一次性使用,因此您可以根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)總量合理配制使用。


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