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總蛋白(Total Protein,TP)由白蛋白和球蛋白組成，檢測白蛋白的方法有雙縮脲法、染料結(jié)合法，其中檢測白蛋

白的染料結(jié)合法可采用溴甲酚綠或溴甲酚紫染料結(jié)合，上述染料對白蛋白具有高度的親和力，通常監(jiān)測染料與白蛋白結(jié)合

的初速率，該速率與樣品中白蛋白濃度成正比。

白蛋白檢測試劑盒(溴甲酚綠微板法)檢測原理是在酸性環(huán)境下，白蛋白分子帶正電荷，與帶負(fù)電荷的溴甲酚綠(Bromocresol green，BCG)結(jié)合生成藍(lán)綠色復(fù)

合物，在628nm處有吸收波，該復(fù)合物的吸光度與白蛋白濃度成正比，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，求得待測樣品中

白蛋白濃度，多用于人或動物血清、血漿、組織等樣本中的蛋白含量測定，該法操作簡單、方法特異，既可手工操作，

又可采用自動分析儀檢測。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項:

1、實驗材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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