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堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi)，其活性所需最適pH 9.2~9

.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及

微動脈和毛細血管動脈部之內(nèi)皮，還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及

平滑肌的細胞膜。

堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(PNP微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP比色法，其檢測原理是

Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)為一種常用的磷酸酶顯色底物，在酸性條件下，可在堿性磷酸酶的作用下生成

p-nitrophenol；在堿性條件下p-nitrophenol轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈較深的黃色，產(chǎn)物黃色越深說明堿性磷酸酶活性越高，

反之則酶活性越低，通過比色法(酶標儀)測定400～415nm處吸光度，據(jù)此通過比色分析就可以計算出堿性磷酸酶活性水平

，可用于檢測細胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內(nèi)源性的堿性磷酸酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域

，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標準品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標準(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標準(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_到60μg/ml。

注意事項:

1、實驗材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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