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目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>試劑盒>>檢測(cè)試劑盒>> TE0131(AST)檢測(cè)試劑盒(賴氏微板法)

(AST)檢測(cè)試劑盒(賴氏微板法)
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參考價(jià) 150
訂貨量 ≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
150
≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 雅吉生物
  • 型號(hào) TE0131
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時(shí)間:2024-11-01 10:04:54瀏覽次數(shù):233評(píng)價(jià)

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貨號(hào) TE0131 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合
(AST)檢測(cè)試劑盒(賴氏微板法),雅吉生物是一家生物企業(yè)主營(yíng)ATCC細(xì)胞,細(xì)胞系,原代細(xì)胞和培養(yǎng)試劑,重組蛋白,ELISA試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒

轉(zhuǎn)氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之間氨基轉(zhuǎn)換反應(yīng)的一組酶,氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)舊稱谷丙(GPT)主要存在于肝細(xì)胞漿

內(nèi),細(xì)胞內(nèi)ALT濃度遠(yuǎn)高于血清,肝細(xì)胞破壞后血清ALT立即迅速升高,因此谷ALT被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的

檢測(cè)指標(biāo)。


(AST)檢測(cè)試劑盒(賴氏微板法)其檢測(cè)原理是ALT催化丙氨S與α-酮戊二酸之間的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng),


二硝基苯肼與α-酮酸反應(yīng)生成相應(yīng)的二硝基苯腙,在堿性條件下二硝基苯腙的吸收光譜有差異,酶標(biāo)儀檢測(cè)在500~520nm處差

異最大,以等摩爾濃度計(jì)算出的生成量,進(jìn)而計(jì)算酶的活性。100T該檢測(cè)試劑盒可檢測(cè)50個(gè)樣本(不含標(biāo)準(zhǔn)品),

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

自備材料:

1、蒸餾水

2、離心管

3、水浴鍋或恒溫箱

4、96 孔板、酶標(biāo)儀

操作步驟(僅供參考):

1、準(zhǔn)備樣品:

①血漿、血清樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備,可以直接用于本試劑盒的測(cè)定,-20℃

保存 1 個(gè)月有效,用于 ALT/GPT 的檢測(cè)。

②細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿,低速離心取上清,-20℃保存 1 個(gè)月有效,

用于 ALT/GPT 的檢測(cè)。

③(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度,以便于后續(xù)計(jì)算單

位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的 ALT/GPT 含量。

2、 制作 ALT 標(biāo)準(zhǔn)曲線:取丙酮S標(biāo)準(zhǔn) 1 支,準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)稀釋液 1ml,充分混勻,

即配制成丙酮標(biāo)準(zhǔn)(100mmol/L),4℃保存?zhèn)溆?。臨用前,按丙酮標(biāo)準(zhǔn)(100mmol/L):丙

酮S標(biāo)準(zhǔn)稀釋液=1:49 的比例混合,即為丙酮標(biāo)準(zhǔn)工作液-丙酮標(biāo)準(zhǔn)(2mmol/L),以 96

孔板,按下表制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好設(shè)定平行檢測(cè)孔,求平均值。

混勻,向各管中加入苯肼顯色液 20ul,混勻,37℃孵育 20min,加入 ALT 顯色基液 200ul,

混勻。室溫放置 5min,以蒸餾水調(diào)零,酶標(biāo)儀 505nm 處讀取各管吸光度。各管吸光度均減

去"0"號(hào)管吸光度,所得吸光度差值(縱坐標(biāo))與對(duì)應(yīng)的卡門(mén)酶活力單位(橫坐標(biāo))作圖。注意:

標(biāo)準(zhǔn)品用分光光度計(jì)檢測(cè)參考值在 0.3~0.9 之間,加入 ALT 顯色基液后其顏色依次為黃色至

棕紅色,應(yīng)及時(shí)檢測(cè),隨著時(shí)間的延長(zhǎng)其顏色會(huì)加深,由于檢測(cè)儀器、操作手法等條件的不

同,參考值范圍會(huì)有波動(dòng)。

3、 ALT 加樣:按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并注意避免產(chǎn)生

氣泡。如果樣品中的 ALT 酶活性過(guò)高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

4、 ALT 測(cè)定:混勻,室溫放置 5min,以蒸餾水調(diào)零,酶標(biāo)儀 505nm 處測(cè)定對(duì)照管、測(cè)定

管的吸光度(即為 A 對(duì)照、A 測(cè)定),如無(wú) 505nm 可選擇 500~520nm。

計(jì)算:以系列標(biāo)準(zhǔn)孔活力卡門(mén)單位為橫坐標(biāo),以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,以

(A 測(cè)定-A 對(duì)照)之差值,從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得 ALT 活力卡門(mén)單位

參考范圍:成年健康人血清 ALT:5~25 卡門(mén)單位/ml

注意事項(xiàng):

1、苯肼顯色液溶解以后,如果仍然有結(jié)晶析出,應(yīng)過(guò)濾后使用或棄用。

2、由于賴氏法的特點(diǎn),在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)每個(gè)點(diǎn)最好做 3 管的重復(fù)測(cè)定,求出各標(biāo)準(zhǔn)管的

吸光度均值,減去“0"號(hào)管吸光度均值,對(duì)照賴氏單位繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3、血清中 ALT 活性在室溫可以保存 2 天,4℃保存 1 周,-20℃保存 1 個(gè)月。

4、成批樣本測(cè)定時(shí)一般無(wú)需每份樣本都做自身血清對(duì)照,以試劑空白管代替即可。

5、對(duì)于超過(guò)正常范圍的血清樣本,應(yīng)該進(jìn)行復(fù)測(cè),復(fù)測(cè)時(shí)每份樣本都應(yīng)做自身血清對(duì)照。

6、嚴(yán)重黃疸、脂血或溶血的血清,可能會(huì)引起測(cè)定管吸光度增高,因此檢測(cè)該類樣本時(shí)應(yīng)

做自身血清標(biāo)本對(duì)照。

7、當(dāng)樣本的酶活力大于 150 卡門(mén)單位時(shí),應(yīng)將樣本進(jìn)行 5~10 倍稀釋后再行測(cè)定。


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