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血清血漿microRNA提取試劑盒含量較組織細(xì)胞或外周血低，市面上現(xiàn)有的試劑盒提取血清血漿小RNA的得率普遍較低，因此很難用于后續(xù)的

定量檢測。新?；蜓逖獫{miRNA提取試劑盒通過一步上柱即可獲得高純度miRNA，可在10min左右完成小RNA的提取，

是目前提取小RNA（<200nt）操作步驟簡單、重復(fù)性最好、小RNA產(chǎn)率最高的方法。使用該試劑盒提取的小RNA

（Small RNA）中，長度在15～200nt范圍的RNA在95%以上，基本不含有大RNA和DNA，可直接用于后續(xù)的反轉(zhuǎn)錄、

Northern 雜交、測序等應(yīng)用。

組分

名稱數(shù)量

B1804AB1804B

Serum/Plasma miRNA Reagent15ml60ml

miRNA 吸附柱25套100套

RnaseFree TE Buffer5ml5ml

儲存

室溫可保存2年。

常見問題

(1) 由于血清血漿中的miRNA含量極低，提取的miRNA濃度通常在5 ng/μl以下，因此難以用常規(guī)的NanoDrop測量濃度，建議直接使用10μl進(jìn)行下游反轉(zhuǎn)錄。由于本試劑盒提取的是小RNA，該濃度下的miRNA Copy數(shù)足以進(jìn)行下游檢測。

(2) 由于血清血漿中miRNA的含量低，為了獲得更可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，建議使用特異性和靈敏度更好的TaqMan探針法進(jìn)行miRNA的下游檢測。本試劑盒提取的miRNA并不限于其它檢測方法和用途，包括SYBR Green法檢測、二代測序、芯片等檢測領(lǐng)域。

(3) 新海基因的D1803血清血漿TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒為血清血漿專用，不可用于細(xì)胞和組織的miRNA檢測實(shí)驗(yàn)。使用D1803獲得的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物僅可使用本公司的HG TaqMan miRNA qPCR試劑盒（貨號：TAPXXXXX）。在使用D1803反轉(zhuǎn)錄條件下，應(yīng)用貨號為TAP01511檢測內(nèi)源hsa-miR-16， Ct值通常在24左右。

(4)外源性內(nèi)參可單獨(dú)訂購cel-miR-39 標(biāo)準(zhǔn)品（貨號：B1805），每個樣品每次提取cel-miR-39的使用量為50fmol。

(5)抗凝血劑要避免使用含有肝素的凝血管，因?yàn)楦嗡貢种品崔D(zhuǎn)錄 (reverse tranion) 和聚合酶 (polymerase) 的反應(yīng)。

血清血漿microRNA提取試劑盒恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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