半胱氨酸（cysteine, Cys）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
蛋白質(zhì)含有三種含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中，Cys 是唯yi一種含有巰基的含硫氨基酸，從甲硫氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái)，并且可與胱氨酸互相轉(zhuǎn)化。Cys 參與蛋白質(zhì)二硫鍵的形成，經(jīng)常是蛋白質(zhì)活性中心的組成部分，還可以為其它生理生化反應(yīng)提供巰基。此外，Cys 大量積聚在皮膚和粘膜表面，在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性，并且補(bǔ)充巰基，以維持皮膚的正常代謝，調(diào)節(jié)表皮最下層的色素細(xì)胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過(guò)敏性皮膚等作用。
測(cè)定原理：
Cys 還原磷鎢酸生成鎢藍(lán)，在 600nm 處有吸收峰；通過(guò) 600nm 吸光度，計(jì)算Cys 含量。
組成：
產(chǎn)品名稱(chēng) | BH6013-50T/48S | Storage |
試劑一：液體 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑二：液體 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ 避光 |
說(shuō)明書(shū) | 1 份 |
試劑三用前 1 天，向試劑三中加 5 ml 蒸餾水充分溶解，再加 85％磷酸 1.25ml，混勻后蓋緊（防止水分散失）沸水浴 2h；冷卻后加 20 ml 蒸餾水，4℃可保存 2 周。
標(biāo)準(zhǔn)品臨用前加 10 ml 蒸餾水，充分溶解。1μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)液，4℃避光保存。用不完的試劑 4℃可保存 3 天。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1ml 玻璃比色皿、85％磷酸和蒸餾水。
半胱氨酸提取：
1. 液體樣品中半胱氨酸提?。喝?0.1ml 液體樣品，加試劑一 0.9ml，充分混勻，8000g
4℃離心 10min，取上清液，待測(cè)。
2. 組織中半胱氨酸提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入 1ml 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心 10 min，取上清液待測(cè)。
3. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 600 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 100 μl 蒸餾水，500μl 試劑二，500μl 試劑三，混勻后室溫靜置
15 min，于 600nm 處測(cè)定吸光值，記為A 空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 100 μl 標(biāo)準(zhǔn)液，500μl 試劑二，500μl 試劑三，混勻后室溫靜置
15 min，于 600nm 處測(cè)定吸光值，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 100 μl 上清液，500μl 試劑二，500μl 試劑三，混勻后室溫靜置
15 min，于 600nm 處測(cè)定吸光值，記為A 測(cè)定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。
計(jì)算公式：
1. 按液體樣品的體積計(jì)算：
半胱氨酸含量（μmol/ml）=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×（V樣總÷V 樣）=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)
2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算：
半胱氨酸含量（μmol/g 鮮重）=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×
（V 樣總÷V 樣）÷W=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ÷W
3. 按照蛋白濃度計(jì)算：
半胱氨酸含量（μmol /mg prot）= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]÷
（V 樣×Cpr）=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ÷Cpr
4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：
氨基酸含量（μmol /104 cell）=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)] ×
（V 樣總÷V 樣×細(xì)胞數(shù)量）=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1μmol/ml；V 標(biāo)準(zhǔn)品：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.1 ml；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣品提取液體積，0.1 ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml。W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度， mg/ml。
注意事項(xiàng)：
最di檢出限為 100μmol/L。
