BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書
微量法 100T/96S
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測定原理：
堿性條件下，蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將 Cu2+還原成Cu+；2 分子的BCA 與Cu+結(jié)合，生成紫色絡(luò)合物，在 540-595nm 有吸收峰，562nm 處吸收峰zui強(qiáng)。
組成：
產(chǎn)品名稱 | DE6004-100T/96S | Storage |
試劑A: 液體 | 25ml | 4℃ |
試劑B：液體 | 0.5ml | 4℃ |
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 | 2ml | 4℃ |
工作液配制：臨用前請根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×0.2ml），將試劑A 和B 按照 50：1 的比例混合，蓋緊后充分混勻。
自備儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸餾水。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：
1、液體樣品：澄清液體樣品可以直接測定。
2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。
3 、細(xì)菌、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000rpm， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
測定操作：
1. 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 562 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 工作液置于 60℃水浴預(yù)熱 30 min。
|
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
|
蒸餾水（μl） | 4 |
|
|
標(biāo)準(zhǔn)品（μl） |
| 4 |
|
待測液（μl） |
|
| 4 |
工作液（μl） | 200 | 200 | 200 |
混勻后置于 60℃保溫 30min，于微量玻璃比色皿/96 孔板，于 562nm 處測定吸光值A，分 別記為A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 測定管。 |
注意事項(xiàng)：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。
計(jì)算公式：
Cpr (mg/ml)= C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）
=0.5×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）
Cpr (mg/g 鮮重)= C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷ W
=0.5×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷ W W: 樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
BCA 法蛋白含量測定試劑盒，適用于測定蛋白濃度在 20-5000μg/ml 樣品。測定前取 1-2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，若A 測定管－A 空白管﹥1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測定，以確保測定的準(zhǔn)確性。
