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分子雜交儀是一種用于檢測待測基因組中是否含有已知基因序列的設備,基于核酸分子雜交技術。它通過特定的探針與待測樣本中的目標序列進行雜交反應,從而實現(xiàn)對目標序列的檢測和分析。
工作原理
分子雜交儀的工作原理基于堿基互補配對原則。在一定條件下,用標記的已知DNA或RNA(探針)來檢測樣本中是否有待測的核酸序列。在生理條件下,DNA呈穩(wěn)定的雙鏈螺旋結構,但在體外,通過變性因素(如高溫、含胺或JI端pH)使DNA分子內部的氫鍵斷裂,形成單鏈。去除變性因素后,單鏈DNA能通過堿基互補再結合成穩(wěn)定的雙鏈結構,這一過程稱為復性或退火。如果樣本中含有與探針相同或高度同源的序列,兩者會形成雜交體,即雙鏈DNA分子。
應用領域
分子雜交儀在多個領域有廣泛應用:
基因克隆:在基因克隆過程中,分子雜交儀能夠精確控制PCR反應的溫度,確保引物與模板DNA之間的雜交反應順利進行,優(yōu)化反應條件,提高克隆效率。
基因表達分析:在基因表達分析實驗中,分子雜交儀為基因芯片等高通量基因表達分析技術提供穩(wěn)定的雜交環(huán)境,確保雜交反應的準確性和可靠性。
基因診斷:通過分子雜交實驗,可以檢測樣本中特定的基因突變或特定基因序列的擴增情況,廣泛應用于遺傳性疾病的診斷。
蛋白質研究:在蛋白質相互作用研究中,分子雜交儀幫助研究蛋白質與DNA、RNA或其他蛋白質之間的相互作用,揭示蛋白質在細胞內的功能和調控機制。
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