傳統(tǒng)的分離線粒體的方法耗時(shí)費(fèi)力， 并且需要進(jìn)行Dounce勻漿，所以每次只能處理一種樣品。ThermoScientific線粒體分離試劑盒使用的是基于試劑的非機(jī)械分離方法，不需要特殊儀器，因此可以同時(shí)處理多種樣品（六種）。利用配方的試劑對(duì)培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞沉淀進(jìn)行溫和的裂解可以得到量的線粒體，且將對(duì)線粒體完整性的傷害降至最小。該產(chǎn)品的說(shuō)明書(shū)介紹了純度/收率比的優(yōu)化指南。該試劑盒也提供了配合使用杜恩斯勻漿的方法，使用該方法可以得到比單使用試劑的方法高兩倍的線粒體回收率。兩種方法通過(guò)差速離心分離線粒體和胞漿成分，使用臺(tái)式微量離心機(jī)可以在大約40分鐘以?xún)?nèi)完成實(shí)驗(yàn)（收獲細(xì)胞之后）。分離的線粒體可以用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝研究以及線粒體蛋白質(zhì)組研究等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
- 快速 – 從2 x 107個(gè)細(xì)胞中分離完整的線粒體僅需40分鐘(收獲細(xì)胞之后)。
- 靈活 – 使用基于試劑的方法可以同時(shí)處理多個(gè)樣品，配合使用Dounce勻漿的方法可獲得量的線粒體。
- 可優(yōu)化 – 說(shuō)明書(shū)中提供了純度/收率比的優(yōu)化指南。
- 簡(jiǎn)單 – 僅需臺(tái)式微量離心機(jī)和微量離心管即可。
- 相容性強(qiáng) – 分離的線粒體可以用去垢劑進(jìn)行裂解，并且與所有的后繼實(shí)驗(yàn)兼容，包括2D電泳。
線粒體完整性分析。分別使用基于試劑的方法(A和B)和Dounce勻漿法（C和D）從C6細(xì)胞中制備線粒體和胞漿組分。利用蛋白質(zhì)免疫印跡分析各組份中 (A和C)以及電壓依賴(lài)性離子通道(VDAC) (B和D)。使用的底物為用于蛋白免疫印跡的SuperSignal皮克級(jí)化學(xué)發(fā)光底物(產(chǎn)品貨號(hào) 34080)。M = 線粒體，C=胞漿
分析線粒體組份中的胞漿蛋白污染。從NIH 3T3細(xì)胞制備線粒體和胞漿蛋白組分。利用蛋白質(zhì)免疫印跡分析各組份中的胞漿蛋白hsp90。M = 線粒體，C =胞漿。
降低線粒體組份中溶酶體和過(guò)氧化物酶體污染。利用基于試劑的改良分離方法制備了線粒體組份和胞漿組分。3,000 xg 離心收集較重的更純的線粒體，12,000xg離心收集上清中的線粒體。利用蛋白質(zhì)免疫印跡分析每個(gè)組份中A. 過(guò)氧化物酶體膜蛋白70 (PMP70, C6細(xì)胞)和B.溶酶體組織蛋白酶S (NIH3T3細(xì)胞)。M1 = 3,000 xg 線粒體組份，M2 = 12,000 xg 線粒體組份，C =胞漿。
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