NobleRyder C9208 Rosetta (DE3) 感受態(tài)細胞Rosetta (DE3)

產(chǎn)品貨號：C9208

產(chǎn)品名稱：Rosetta (DE3) 感受態(tài)細胞Rosetta (DE3)

英文名稱：Rosetta (DE3)

產(chǎn)品規(guī)格：10*100ul /20*100ul

Rosetta (DE3) 感受態(tài)細胞 載體構建

產(chǎn)品簡介：

外觀(性狀)：干冰運輸，需加干冰費。

儲存條件：液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個月

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder C9208 Rosetta (DE3) 感受態(tài)細胞Rosetta (DE3)是采用大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA 的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達107cfu/µg，-70℃保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。

基因型: F-ompThsdSB(rB- mB-)galdcmlacY1(DE3)pRARE(argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL)(Camr)

特點:該菌株是攜帶氯mei素抗性質粒BL21的衍生菌，補充大腸桿菌缺乏的6種稀有密碼子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC, GGA)對應的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達水平。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1、將感受態(tài)細胞置于冰上融化，以下實驗以100ul感受態(tài)細胞為例。

2、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速轉移到冰浴中放置2-3分鐘注意不要搖動離心管。

4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃180rpm振蕩培養(yǎng)1小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整，如轉化的DNA總量較多，可取100ul左右的轉化產(chǎn)物涂板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項：

1、感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。

2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3、轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會

降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。

4、轉化率的計算：轉化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉化，將損失降到最di。

Rosetta (DE3) 感受態(tài)細胞 載體構建

產(chǎn)品訂購信息：

C9208  Rosetta (DE3) 感受態(tài)細胞Rosetta (DE3) 10*100ul /20*100ul