諾博萊德 RNAzol Plus Reagent  核酸提取

免氯仿總 RNA 提取試劑RNAzol Plus Reagent (NO Chloroform) 

目錄號：91021

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

異丙醇、RNase-Free H2O、75%乙醇（使用 RNase-Free H2O 配制）

保存條件

在室溫下能穩(wěn)定保存12個月。盡管如此，為達(dá)到最佳效果，我們建議保存在2 ~ 8℃。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

與傳統(tǒng) Trizol 提取方法相比，RNAzol Plus 不需要使用氯仿進(jìn)行分層，操作更簡單，且全程可在常溫進(jìn)行。

RNAzol Plus Reagent是Trizol的升級版——免氯仿，具有和Trizol類似的適用范圍，可以從動物組織、培養(yǎng)細(xì)胞、植物材料、真菌、細(xì)菌及各種微生物等樣品中提取總RNA。

本產(chǎn)品提取的 RNA 沒有 DNA 和蛋白的污染，可以直接用于 cDNA 克隆、RT-qPCR 檢測、mRNA 純化、體外翻譯、Northern blotting 雜交、高通量測序等各種分子生物學(xué)實驗。

RNAzol Plus 既可用于小量樣本（50-100mg 組織、5×10⁶ 細(xì)胞）的總RNA 提取，又可用于大量樣本（≥1g組織、≥10⁷細(xì)胞）的總RNA提取。

注意事項

1) RNA在裂解液RNAzol Plus中時不會被RNase降解，但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的吸頭，建議直接購買GeneBetter商品化的RNase-Free的吸頭。研缽用水徹di洗凈，在150℃烘干即可。

2) 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量。

3) 樣品加入裂解液RNAzol Plus勻漿后，樣品可在–80℃保存一個月以上。

4) 取 RNA 樣本時，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA樣品保存液，91115-100)中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周，在 4℃保存一個月，在-20℃或者–80℃長期保存。

操作步驟

提示：所有離心步驟均需要在室溫（15 ~37℃）下進(jìn)行，提取效果更佳！

1. 材料處理：

a．植物組織（植物、真菌）：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織jian碎后在 RNAzol Plus 中研磨。每20-50mg組織加0.5ml裂解液RNAzol Plus，劇烈渦旋震蕩20 sec，混勻。

b．動物組織：取新鮮或-70℃凍存組織，每15-50mg 組織加 0.5ml裂解液 RNAzol Plus，用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理?；?qū)⒔M織在液氮中磨碎后加入RNAzol Plus，劇烈渦旋震蕩 20 sec，混勻。

c． 單層貼壁培養(yǎng)細(xì)胞：吸去培養(yǎng)液，加入適量裂解液RNAzol Plus，每10 cm² 加 0.5ml 裂解液RNAzol Plus，（例如：3.5cm培養(yǎng)皿加0.5ml RNAzol Plus）, 用移液器反復(fù)吹打幾次，裂解細(xì)胞。

d．細(xì)胞懸液（動物細(xì)胞、植物、酵母、細(xì)菌）：離心收集細(xì)胞，棄上清，每5×10⁶ 個細(xì)胞加0.5ml裂解液RNAzol Plus。加裂解液 RNAzol Plus 前不要洗滌細(xì)胞，以免降解 mRNA。

e．血液（血液、血漿、血清）：每 200 ul（低于 200 ul 時，可用 RNase-free H2O 補(bǔ)足）血液、血漿、血清等液體樣本，加入 0.5 ml RNAzol Plus后，劇烈渦旋震混勻 。

2. 加入200 ul RNase-free H2O(RNAzol Plus 體積的0.4倍)，蓋好管蓋，劇烈振蕩混勻，室溫放置5min。

3. 室溫 12,000 rpm離心15 min，樣品將分為二層，下層沉淀和上層水相，RNA主要在上層水相(約630 ul)中，轉(zhuǎn)移500 ul水相到一新的離心管中。

注意：提取微量樣本時，如果不出現(xiàn)分層，則轉(zhuǎn)移全部上清。

4. 在得到的水相溶液中加入等體積的異丙醇，顛倒混勻，室溫放置 10 min。

5. 室溫 12,000 rpm 離心 10 min，通常可以看到白色沉淀，棄上清。

（離心前 RNA 沉淀通常是看不見的，離心后在管側(cè)或管底成薄片狀沉淀。）

6. 加入 1ml 75%乙醇洗滌沉淀，渦旋震蕩 15 sec,讓沉淀懸浮起來，并上下顛倒數(shù)次。

7. 室溫 12,000 rpm 離心 3 分鐘，倒出上清，注意不要倒出沉淀，剩余的少量液體短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。

8. 可選步驟：重復(fù)步驟6和7一次，可增加純度。

9. 室溫放置約1分鐘，晾干。加入50~100 ul的RNase-Free ddH2O，吹打混勻，充分溶解RNA。

10. 得到的RNA，可立即用于下游實驗，或于-70℃保存，防止降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

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