諾博萊德 果實(shí)/種子總RNA快速提取試劑盒

果實(shí)/種子總 RNA 提取試劑盒Fruit / Seed Total RNA Mini Kit

目錄號(hào)：91513

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

室溫（15 ~ 25℃），有效期 12 個(gè)月。

自備試劑

無(wú)水乙醇，β-巰基乙醇

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

適用于快速提取果實(shí)、種子、中草藥的總 RNA，gDNA 過(guò)濾器能高效濾除 gDNA， RNA 可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR、普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RACE、芯片等。

成功案例：稻谷種子、玉米種子、小麥種子、葡萄果實(shí)、板栗、櫻桃、草莓、芒果、百合鱗莖、唐菖蒲的球莖、中草藥的塊根...

如果遇到果實(shí)、種子、中草藥，例如：多糖多酚巨高的作物種子（小麥/玉米/大豆/水稻）、葡萄果實(shí)、藍(lán)莓果實(shí)、百合鱗莖、土豆塊莖；或者次級(jí)代謝產(chǎn)物巨豐富的葛根、虎杖、雪蓮等藥用植物，請(qǐng)選擇 91513-果實(shí)種子總RNA 提取試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提取全過(guò)程僅需 30min！

注意事項(xiàng)

1. 如果 FSL 有析出或者沉淀，請(qǐng)將其置于 65℃水浴中，重新溶解后使用。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量。

操作步驟：

重要提示：

① 第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液 RW 中加入無(wú)水乙醇，加入量詳見(jiàn)瓶身標(biāo)簽。

② 操作前，取 1ml 裂解液 FSL 至 2.0ml 離心管內(nèi)，加入 5%的 β-巰基乙醇

（例如：1ml FSL 加 50μl β-巰基乙醇），顛倒混勻后，65℃水浴中預(yù)熱。多個(gè)樣本按比例放大準(zhǔn)備。

③ β-巰基乙醇是裂解液 FSL 的關(guān)鍵成分，必要的時(shí)候可以提高終濃度到10～20%，來(lái)防止樣品褐化。如果碰到特別復(fù)雜的植物，可以嘗試在裂解液中再加入 PVP40 至終濃度 2%。

④ 所有離心步驟均需要在室溫（15℃～25℃）下進(jìn)行。

1. 材料處理：

a．將植物樣本在液氮中迅速研磨成細(xì)粉。

b．轉(zhuǎn)移 30～200 mg 細(xì)粉至 65℃預(yù)熱的裂解液 FSL（已加有 β-巰基乙醇）中，立即劇烈渦旋震蕩 30 Sec，充分混勻。

注意：水分多的樣品（如草莓、西瓜果肉）投入 150～200 mg； 水分含量少的樣品（如成熟的小麥/玉米/大豆種子）投入 30～40 mg； 淀粉含量高的塊莖投入 40～80mg；葉片投入 50～100 mg。

c．短暫回放至 65℃水浴 5 min，中間偶爾顛倒 1～2 次，幫助裂解。

d．將裂解物 13,000 rpm 離心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

e．轉(zhuǎn)移上清（約 800~900 μl）至新的 2.0 ml 離心管中，加入 0.5 倍體積的無(wú)水乙醇（約 400~450 μl），吹打混勻。

2. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 過(guò)濾器中（過(guò)濾器放入收集管），13,000 rpm 離心 2 min，倒棄濾液。重復(fù)此過(guò)程，直到混合液全部轉(zhuǎn)入gDNA 過(guò)濾器。此時(shí)，絕大部分 gDNA 被濾除，RNA和少量gDNA殘留被吸附在膜上。

3. 取出步驟2的gDNA過(guò)濾器，放入一個(gè)新的2.0 ml離心管中，加入500 μl 裂解液 ARL，13,000 rpm 離心 30 sec，收集濾液（RNA 在濾液中），向?yàn)V液中加入 250μl 無(wú)水乙醇，吹打混勻。

4. 將濾液混合物加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 2 min，倒棄濾液。此時(shí)，RNA 被吸附在膜上。

5. 加入700μl 去蛋白液 RW1，室溫放置1min，13,000 rpm 離心30sec，倒棄濾液。

6. 加入500μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

7. 重復(fù)步驟6一次。

8. 將RNA吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心2 min，除去膜上殘留的乙醇。

9. 取出RNA吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加 30~50μl的RNase-free H₂O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心1min。

10. 提取的總 RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，以免降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有 qPCR 儀

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