諾博萊德 CTAB植物基因組DNA快速提取試劑盒

CTAB植物基因組DNA快速提取試劑盒-現(xiàn)貨

目錄號：40114

適用范圍：

適用于快速提取植物基因組DNA

試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。

儲存事項:

1. 裂解液 PL、結(jié)合液 PQ 或者抑制物去除液 IR 低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 55℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品介紹：

改進(jìn)的經(jīng)典 CTAB 植物 DNA 抽提液內(nèi)（添加多種針對植物特點(diǎn)的多糖、多酚去除成份）迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，氯仿抽提后通過離心清除多糖、多酚和蛋白質(zhì)（根據(jù)需要，上清中還加入異丙醇離心沉淀基因組 DNA，進(jìn)一步去除其它各種雜質(zhì)），然后基因組 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 進(jìn)一步將多糖、多酚和細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2.不需要使用有毒的ben酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟?？焖?，簡捷，單個樣品操作一般可在1小時內(nèi)完成。

3.數(shù)種去多糖、多酚成份和多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)

4. 1.7～1.9，長度可達(dá)30kb-50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)

注意事項：

1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C或者類似離心機(jī)。

2.開始實(shí)驗前將需要的水浴先預(yù)熱到65℃備用。

3.需要自備氯仿/異戊醇（體積比24：1混合）、無水乙醇和β-巰基乙醇。

4.結(jié)合液PQ 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5.不同來源的植物組織材料中提取DNA 的量會有差異，一般100mg新鮮組織典型產(chǎn)量可達(dá)3-25μg。

洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保pH大于7.5，pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫 （10mM Tris-HCl，1mMEDTA，pH8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時可以適當(dāng)稀釋。    

標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：（實(shí)驗前請先閱讀注意事項）提示：

e第一次使用前請先在漂洗液WB和結(jié)合液PQ中加入指ding量的無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!

e取所需適量裂解液PL放置在65℃預(yù)熱，使用前加入β-巰基乙醇到終濃度2%。

1.取適量植物組織（新鮮組織100mg或干重組織30mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細(xì)粉。

2.轉(zhuǎn)移細(xì)粉到一個1.5ml離心管，不要解凍，加600μl65℃預(yù)熱的裂解液PL(確認(rèn)已加入β-巰基乙醇至2%)，劇烈渦旋振蕩混勻，用大口徑槍頭輕柔吹打幫助裂解。

（如果組織裂解困難，可根據(jù)需要加一個輕柔勻漿10秒的步驟幫助裂解。）

3.65℃水浴20-60分鐘，在水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。

（可選:如果組織干燥或者產(chǎn)量低，可以適當(dāng)延長水浴時間。如果RNA殘留多，可在水浴前加入6μl RNA酶（20mg/ml）。）

4.加入700μl氯仿/異戊醇（體積比24：1混合），顛倒充分混勻幾分鐘（或者渦旋混勻），13,000rpm離心5分鐘。

（若提取的植物組織富含多糖多酚，可以在第 4 步前用等體積酚/氯仿（1：1）抽提一遍。）

5.小心吸取上清到一個新的1.5ml離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)。

（如上清比較渾濁，則需要重復(fù)步驟4一遍，直到得到透亮上清。）

6.較精確估算上清量，加入1.5倍體積結(jié)合液PQ（請先檢查是否已加入無水乙醇!）

后立刻渦旋，充分混勻。此時可能出現(xiàn)沉淀，但不影響實(shí)驗結(jié)果。

7. 將上一步所得混合物（包括可能出現(xiàn)的沉淀）加入一個DNA吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液（先加700μl離心，棄廢液，再加入剩余的溶液，再次離心）。

8.加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm離心30秒，棄廢液。

9.加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。

10.加入500μl漂洗液WB，12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。

11.將DNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

12.取出DNA吸附柱，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中央加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱），室溫放置3-5分鐘，12,000rpm離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。

（洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果預(yù)計和需要產(chǎn)量高，可增大洗脫體積，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積，但是最小體積不應(yīng)少于 50μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。）

13.DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。

附錄（低DNA含量或者產(chǎn)量低樣品操作步驟）：

1.取適量植物組織（新鮮組織400mg或干重組織200mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細(xì)粉。

2. 轉(zhuǎn)移細(xì)粉到一個15ml離心管，不要解凍，加入9ml65℃預(yù)熱的裂解液PL(確認(rèn)已經(jīng)加入β-巰基乙醇至 2%)，劇烈渦旋振蕩混勻，用大口徑槍頭吹打幫助裂解。

（如果組織裂解困難，可根據(jù)需要加一個輕柔勻漿 10 秒的步驟幫助裂解。）

3.室溫放置60分鐘，中間不時顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。

（如果組織干燥或者產(chǎn)量低，可以放置在65℃水浴。）

4.加4.5ml氯仿/異戊醇（體積比24：1混合），渦旋充分混勻，3,000g離心10分鐘。

5.小心吸取上清到一個新的15ml離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)。重復(fù)一遍步驟4。

6.小心吸取上清到一個新的15ml離心管，估算上清量，加入0.7倍體積的異丙醇，渦旋混勻來沉淀DNA。

7.立刻3,000g離心20分鐘沉淀DNA，棄上清，顛倒離心管口放在紙巾上控干殘留液體，并小心用用移液槍吸干沉淀周圍殘留液體（不要過于干燥DNA沉淀）。

8.加入300μl－400μl預(yù)熱到65℃的滅菌水，重新溶解DNA，可能需要在65℃短暫溫育幫助溶解，期間不斷輕彈管底幫助溶解。

9.加入1.5倍體積結(jié)合液PQ（450μl－600μl，請先檢查是否已加入無水乙醇!）后立刻渦旋，充分混勻。此時可能出現(xiàn)沉淀，但不影響實(shí)驗結(jié)果。

10.后續(xù)步驟和上面標(biāo)準(zhǔn)操作步驟7開始后完quan一樣。

CTAB植物基因組DNA快速提取試劑盒-現(xiàn)貨