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北京諾博萊德科技有限公司
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當(dāng)前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>核酸提取>> 31119酵母高純度質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取

酵母高純度質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取

參  考  價面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號31119

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地北京市

更新時間:2025-04-22 17:25:33瀏覽次數(shù):134次

聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 10次
貨號 31119 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 用于高純度酵母質(zhì)粒 DNA 的小量制備
本試劑盒用于高純度酵母質(zhì)粒 DNA 的小量制備。菌體經(jīng)堿裂解、高鹽、低 pH 處理,質(zhì)粒可從菌體中釋放出來,并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除雜質(zhì),在低鹽、高 pH 條件下洗脫,最后得到純度較高的質(zhì)粒 DNA。
酵母高純度質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取

諾博萊德 酵母高純度質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取


HiPure Yeast Plasmid Mini Kit酵母高純度質(zhì)粒大量快速提試劑盒

目錄號:31119-10

產(chǎn)品內(nèi)容:

產(chǎn)品組成

保存

10 次

溶液YP1

室溫

75 ml

溶液YP2

室溫

75 ml

溶液YP3

室溫

100 ml

去蛋白液 PD

室溫

63 ml

漂洗液 WB

室溫

50 ml

洗脫緩沖液 EB

室溫

20 ml

RNase A (10 mg/ml)

-20℃

750 ul

Lyticase

-20℃

1 g

50ml 吸附柱和收集管

室溫

10 套

保存條件:

在室溫(15 ~ 25℃)干燥條件下,可保存 12 個月。加入 RNase A 后的溶液 P1 應(yīng)置于 2 ~ 8℃

保存,可穩(wěn)定保存 6 個月,如果 P1 中 RNase A 失活,重新補加即可。


具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)


產(chǎn)品簡介:

本試劑盒用于高純度酵母質(zhì)粒 DNA 的小量制備。菌體經(jīng)堿裂解、高鹽、低 pH 處理,質(zhì)??蓮木w中釋放出來,并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除雜質(zhì),在低鹽、高 pH 條件下洗脫,最后得到純度較高的質(zhì)粒 DNA。所得質(zhì)粒可直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、RT-qPCR、測序及轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實驗。

注意事項:

1.        通常酵母的拷貝數(shù)都很低,高拷貝最大得率一般為每 5 ml 培養(yǎng)物提取 1 μg 左右的質(zhì)粒。用于下游試驗時通常建議使用量為:1-5 μl 用做 PCR 模板;5-10 μl 用于轉(zhuǎn)化大腸桿菌,選擇高效率的感受態(tài)細胞。

2.  用戶需要自備 Sorbitol buffer( 1M 山li醇, 0.1M Na2EDTA,14 mM β-巰基乙醇)。 配制方法:在 600 ml 去離子水里面溶解 182.2 克山li醇,加入 200 ml 0.5 M Na2EDTA (pH 8.0) ,不需要調(diào)節(jié) PH 值,定容到 1L,4℃保存。臨用前加 0.1%β-巰基乙醇(商品化的 β-巰基乙醇摩爾濃度一般為 14M)。

3.         使用前請先檢查平衡液、溶液 YP2 和溶液 YP3 是否出現(xiàn)渾濁,如有混濁現(xiàn)象,可在 37℃

水浴中加熱幾分鐘,即可恢復(fù)澄清。

4.     溶液YP1,YP2 YP3 的用量比例,若細菌量增大,需按比例放大這些溶液的使用量;

重要提示:

一、第一次使用前請先在去蛋白液 PD、漂洗液 WB 中加入指ding量無水乙醇(見瓶身標(biāo)簽,充分混勻,并做好標(biāo)記,以免多次加入。

二、首ci使用時請先將 RNase A 全部加到溶液YP1 中,混勻,每次使用后置于 2 ~ 8℃保存。三、吸取使用量的Sorbitol buffer 加入 0.1%β-巰基乙醇,回復(fù)到室溫備用。

操作步驟:

1.   取 100 - 180 ml 酵母培養(yǎng)物,12,000 x g 離心 1 min,盡可能的吸棄上清,收集菌體。

(注意: 如果用 50ml 離心管收集菌體,可以離心棄上清后,在同一管內(nèi)加入更多的菌液,重復(fù)步驟

1,直到收集到足夠多的菌體

2. 加入 10 ml Sorbitol buffer,輕柔吹打充分重懸細胞;加入 0.1 g Lyticase (Lyticase 臨用前用 2ml Sorbitol buffer 溶解),充分顛倒混勻,37℃溫育 1 – 2 小時消化細胞壁,中間可顛倒數(shù)次幫助消化。

(注意:如果破壁效果不好導(dǎo)致質(zhì)粒產(chǎn)量低,可以加大 lyicase 用量來提高酶工作濃度,還可以延長消化時間來提高效果,不適合 Lyticase 消化的酵母可選用 Zymolase 或者其它方法如玻璃珠渦旋,反復(fù)凍融等。

3.       12,000 x g 離心 2 min,盡可能吸棄上清,加入 7 ml 溶液YP1,重懸菌體沉淀,渦旋震

蕩至徹di懸浮。

(注意:如有未徹di懸浮的菌塊會影響裂解,導(dǎo)致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低

4.  加入 7 ml 溶液YP2,溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次,使菌體充分裂解,室溫放置 4 min。

(注意:不可劇烈震蕩,以免造成基因組 DNA 片段的污染,所用時間不要超過 5 min,以免質(zhì)粒受到破壞,如未完quan變得清亮,可能是菌體太多,可增加溶液 P2 的用量,在后續(xù)的操作中溶液 YP3 用量也要相應(yīng)增加)

5.  加入 10 ml 溶液YP3,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次,充分混勻時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀,

然后室溫 12,000 x g 離心 10 -15 min, 小心取上清,避免吸到白色漂浮物。

注意:加入溶液 YP3 后應(yīng)立即混合,避免產(chǎn)生 SDS 的局部沉淀,如果上清中還有白色漂浮物,可再次離心取上清)

6.        將上清液加入吸附柱中(吸附柱最大容量 10ml,室溫 12,000 rpm 離心 1 min,質(zhì)粒被

吸附在膜上,棄濾液。重復(fù)步驟直到上清全部被加入吸附柱。

7.        可選步驟:向吸附柱中加入 10 ml 去蛋白液 PD,室溫 12,000 x g 離心 1 min,棄濾液。

8.  加入 10 ml 漂洗液 WB,室溫 12,000 x g 離心 1 min,棄濾液。

注意:漂洗液 WB 為濃縮液,按要求加入無水乙醇,用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋,以防酒精揮發(fā)

9. 重復(fù)步驟 8 一次。

10.      室溫 12,000 x g 離心 2 min,甩干膜上殘留乙醇。打開蓋子室溫晾干 2 – 3 min

(注意:此步不能省略,否則殘留乙醇會影響質(zhì)粒的后續(xù)使用

11.     將吸附柱置于一個新的 50 ml 離心管(自備)中,加入 0.6 - 1ml 的洗脫緩沖液EB,室溫放置 2 min,12,000 rpm 離心 2 min,離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA。

注意:事先在 65~70℃水浴中預(yù)熱洗脫緩沖液 EB,可增加洗脫效率;如果需要較多量質(zhì)粒,可將得到的溶液重新加入吸附柱中,再次離心 1 min 收集;如需使用去離子水洗脫,可用 NaOH 調(diào)整其 pH值在 7.0 - 8.5 之間。


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