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北京諾博萊德科技有限公司
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當(dāng)前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>PCR相關(guān)>> 718142×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)

2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)71814

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地北京市

更新時(shí)間:2025-04-23 09:55:02瀏覽次數(shù):71次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5x 1ml/100x1ml
貨號(hào) 71814 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 用于酶切、連接、熒光測(cè)序等后續(xù)操作
2× LongHiFi PCR Mix為多種采用最xian進(jìn)基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成,極大的提高了擴(kuò)增長(zhǎng)度、擴(kuò)增速度、保真性和產(chǎn)量。2× LongHiFi PCR Mix是長(zhǎng)片段、超保真、快速擴(kuò)增的首xuan產(chǎn)品。
PCR產(chǎn)物為平末端,不需要加A頭,可直接用金百特TOPO- Blunt平末端系列載體克隆。
2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)


諾博萊德 2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)


2× LongHiFi PCR Master Mix (含染料)

 

目錄號(hào):71814

產(chǎn)品內(nèi)容

產(chǎn)品成份

71814-05

71814-0100

2× LongHiFi PCR Master Mix

5× 1 ml

100× 1 ml

保存條件

-20℃保存,有效期 2 年。

經(jīng)常使用,可置于 4 °C 保存,有效期 3 個(gè)月。


具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)


產(chǎn)品簡(jiǎn)介

2× LongHiFi PCR Mix為多種采用最xian進(jìn)基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成極大的提高了擴(kuò)增長(zhǎng)度、擴(kuò)增速度、保真性和產(chǎn)量。2× LongHiFi PCR Mix是長(zhǎng)片段、超保真、快速擴(kuò)增的首xuan產(chǎn)品。

PCR產(chǎn)物為平末端,不需要加A頭,可直接用平末端系列載體(Cat#V116、V117)克隆。

本產(chǎn)品包含LongHiFi DNA Polymerase、dNTPs和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,濃度為2×。使用時(shí),只需加入模板、引物,并補(bǔ)足水至Mix終濃度為1×即可。

本制品含紅色示蹤染料,不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進(jìn)行電泳;也可經(jīng)過純化處理,以用于酶切、連接、熒光測(cè)序等后續(xù)操作。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 高產(chǎn):一般 PCR 產(chǎn)物量比傳統(tǒng)產(chǎn)量高 50%-100%!

2. 高效:延伸速度可以達(dá)到 3-4kb/min,是 pfu 的 6-8 倍!

3. 高成功率:對(duì)于高 GC 模板和特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板有良好效果!

4. 超高保真:保真度是 taq 的 81 倍以上。

5. 擴(kuò)增長(zhǎng)度長(zhǎng):以復(fù)雜基因組 DNA 為模板擴(kuò)增可達(dá) 10kb,以簡(jiǎn)單基因組、質(zhì)粒和噬菌體 DNA 為模板擴(kuò)增可達(dá) 15kb。

2 × LongHiFi PCR Master Mix 使用說明:

一、配制 PCR 反應(yīng)體系:(于冰上配制)

Component

20 μl Reaction

50 μl Reaction

終濃度

2× LongHiFi PCR Mix

10 μl

25 μl

1 ×

Forward Primer (10 μM)

0.4 μl

1 μl

0.2 μM

Reverse Primer (10 μM)

0.4 μl

1 μl

0.2 μM

Template DNA

as required

as required


ddH2O

up to 20 μl

up to 50 μl


參考模板用量:(以 50 μl 反應(yīng)體系為例)

質(zhì)粒:0.1-10 ng;

細(xì)菌基因組:10-100 ng;

人類基因組:50-150 ng;

cDNA:1-5 μl from RT。

注意:實(shí)際操作中,首先要計(jì)算好需要補(bǔ)加 ddH2O 的量以后,建議先加水,然后按上述順序添加其它成分,最后加 LongHiFi PCR Mix,瞬離,上機(jī)。

二、設(shè)置 PCR 循環(huán)條件:(請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整)

Step

Temperature

Time

Cycle Number

Initial denaturation

94℃

3 minutes


Denaturation

94℃

10 seconds

30-35 cycles

Annealing

50-60℃

10-15 seconds

Extension

72℃

15-20 seconds /kb

Final Extension

72℃

5 minutes



4-8℃

Hold


注意:一般情況下,Annealing Temperature = Tm - 5°C

1. 質(zhì)粒和簡(jiǎn)單基因組等簡(jiǎn)單模板,可以采用 10-15 sec/kb;復(fù)雜模板 ( 如人類基因組 DNA ),可以采用 20-25 sec/kb。

2. 對(duì)于高 GC 含量的模板,預(yù)變性和變性溫度可以提高到 98℃。

3. 如果電泳發(fā)現(xiàn)主帶上下拖尾模糊現(xiàn)象,或者泳道出現(xiàn)從上樣孔拖下來的涂抹帶現(xiàn)象,一般提示延伸時(shí)間過長(zhǎng),梯度縮短延伸時(shí)間(建議 10-15sec/kb 為梯度減少延伸時(shí)間)直到獲得滿意結(jié)果。

三、結(jié)果檢測(cè):反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物,瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。


2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)

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