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產(chǎn)品簡介：

豬圓環(huán)病毒（porcine circovirus，PCV）為無囊膜單股負鏈環(huán)狀 DNA 病毒，根據(jù)其抗原性和基因組特性分為4 種基因型。豬圓環(huán)病毒 4 型（PCV4）是 2019 年在我國湖南省患有嚴重臨床疾病的豬群中首-次發(fā)現(xiàn)的一種新型PCV，隨后國內(nèi)多個研究團隊調(diào)查到國內(nèi)各省份均存在 PCV4 的流行。PCV4 可以單獨感染，又可與多種病毒混合感染任何年齡段的豬，其感染后可以導致宿主各器官組織，如肺、肝、淋巴結(jié)等產(chǎn)生明顯病變，但其臨床表征不明顯，大部分為健康狀態(tài)的亞臨床狀態(tài)。

本試劑盒適用于檢測病死豬（包括流產(chǎn)的死胎）或撲殺豬主要臟器（淋巴結(jié)、脾臟、肺臟、腎臟和肝臟）、血清等樣本中的豬圓環(huán)病毒 4 型感染的輔助診斷。

產(chǎn)品特點：

一、嚴格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測結(jié)果更可信。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的豬圓環(huán)病毒4型核酸，不放過任何潛在的感染風險。

三、便捷操作

綜合各項指標特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證，適用于臟器（淋巴結(jié)、脾臟、肺臟、腎臟和肝臟）、血清等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求。

五、個性化定制服務

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實際的檢測方案。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了豬圓環(huán)病毒4型(PCV-4)PCR核酸檢測試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求。

七、完善的售前售后服務

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務團隊，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速、準確、靈敏等優(yōu)點。

適用儀器

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標本采集

組織樣品采集：采取病死豬（包括流產(chǎn)的死胎）或撲殺豬主要臟器（淋巴結(jié)、脾臟、肺臟、腎臟和肝臟）   裝入滅菌 15 mL 離心管中，編號，送實驗室。血清樣品采集：用無菌-注射器抽取受檢豬靜脈血不少于 5 ml，置

于無菌離心管內(nèi)，室溫或者 37℃傾斜放置自然凝集 20 min ~30 min，2 000 r/min~3 000 r/min 離心 10 min，吸取上清液到新的離心管內(nèi)備用。精液樣品采集：按照 GB/T 25172 的方法采集和保存精液。糞便樣品采集：取豬新鮮糞便 1g，裝入 15mI 滅菌離心管中，加入 5mL PBS，混勻。細胞培養(yǎng)物：細胞培養(yǎng)物反復凍融 3 次，第 3 次解凍后，將細胞培養(yǎng)物置于 1.5 mL 無 DNA 酶的滅菌離心管內(nèi)，編號備用。

保存和運輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應不超過 24 h；若需長期保存，應放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

組織樣品：取 1g 解凍的組織，剪碎，加入 2 mL PBS 進行研磨，制備組織勻漿，8000 r/min 離心 5 min，取上清用于后續(xù)的核酸提取。血清和精液樣品無需進行前處理，直接用于核酸提取。糞便樣品：3000 r/min 離心10 min，取上清液，轉(zhuǎn)入 1.5 mL 離心管中，用于后續(xù)的核酸提取。細胞培養(yǎng)物：4000 r/min，4℃離心 l0 min， 取上清用于后續(xù)的核酸提取。

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取， 請按照試劑說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

試劑PCV-4 反應液酶液

用量19μL1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi)；

4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；熒光通道選擇：檢測通道（ReporterDye）FAM，淬滅通道

（QuencherDye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11 cycle95℃2min否

245 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設定（請參照各儀器使用說明書進行設置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應結(jié)束后自動保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實際情況自行調(diào)整，Start 值可設在 3～15、End 值可設在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analyze 自動獲得分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值，且無特異性擴增曲線；

可疑：樣本檢測結(jié)果 40＜Ct 值≤45，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 40<Ct 值≤45，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性。

5.3質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)增長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

6.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

3.陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導致假陽性結(jié)果；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結(jié)果；

6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果；

7.本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的豬圓環(huán)病毒4型(PCV-4)PCR核酸檢測試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！