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產(chǎn)品簡介：

高致病性豬藍耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株引起的一種急性高致死性疫病。其特征是仔豬發(fā)病率   可達 100％、死亡率可達 50％以上，母豬流產(chǎn)率達 30％以上，育肥豬也可發(fā)病死亡。藍耳病是 OIE 規(guī)定的 B 類動物傳染病，一直以來，豬藍耳病在世界范圍內(nèi)普遍流行，是集約化養(yǎng)豬場難以凈化的疾病，給各國養(yǎng)豬業(yè)造成    巨大經(jīng)濟損失。

本試劑盒適用于檢測肺、扁桃體和口腔拭子、全血等標本中高致病性豬藍耳病病毒 RNA，用于對可疑感染病料的病原學診斷。

產(chǎn)品特點：

一、嚴格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測結(jié)果更可信。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的高致病性豬藍耳病病毒核酸，不放過任何潛在的感染風險。

三、便捷操作

綜合各項指標特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證，適用于肺、扁桃體和口腔拭子、全血等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求。

五、個性化定制服務

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實際的檢測方案。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了高致病性豬藍耳病病毒(PRRSV-M)PCR試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領域的檢測需求。

七、完善的售前售后服務

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務團隊，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速、準確、靈敏等優(yōu)點。

適用儀器

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標本采集

病死或撲殺豬，取肺臟、淋巴結(jié)、扁桃體、脾臟等組織；待檢活豬，取口腔拭子或取血 5mL；公豬可采集精液。

血清樣品采集：用無菌-注射器抽取受檢豬靜脈血不少于 5mL，置于無菌離心管內(nèi)，2000r/min~3000r/min 離心 10min，吸取上清液到新的離心管內(nèi)備用。公豬精液：按照 GB/T25172 的方法采集和保存精液?？谇皇米樱?大豬使用保定器保定，小豬可以雙手保定，用采樣拭子蘸取口腔分泌物，放入無菌采樣管中。肺灌洗液：完整摘取肺臟/肺葉，送實驗室進行灌洗。組織樣品：取肺臟、淋巴結(jié)、扁桃體、脾臟等組織，置于無菌離心管內(nèi)備用。

保存和運輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應不超過 24 h；若需長期保存，應放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

血清和精液樣品：無需進行前處理，直接用于核酸提??；口腔拭子樣品：加入 500μL 無菌 PBS，充分渦旋震蕩 1min，反復擠壓拭子，棄去拭子后 3000r/min 離心 5min，取上清用于后續(xù)的核酸提取。肺灌洗液：根據(jù)肺臟/肺葉的大小，通過肺管加入 5mL~10mL 無菌 PBS，反復揉捏，吸取灌洗液，3000r/min 離心 5 min，取上清用于核酸提取。組織樣品：取 1g 組織，剪碎，加入 2mL 生理鹽水進行研磨，制備組織勻漿，8000r/min 離心 5min， 取上清用于后續(xù)的核酸提取。

1.2核酸提取

推薦采用公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份），每測試反應體系配制如下表：

試劑PRRSV-M 反應液酶液

用量19μL1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi)；

4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；熒光通道選擇：

檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光， 選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11 cycle50℃10min否

21 cycle95℃2min否

345 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設定（請參照各儀器使用說明書進行設置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應結(jié)束后自動保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實際情況自行調(diào)整，Start 值可設在 3～15、End 值可設在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analyze 自動獲得分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>40 或無 Ct 值。

5.3質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且Ct 值≤32；以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

6.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

3.陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導致假陽性結(jié)果；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結(jié)果；

6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果；

7.本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的高致病性豬藍耳病病毒(PRRSV-M)PCR試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！