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產(chǎn)品簡介：

RT-LAMP MasterMix（熒光染料法）含有熒光 RT-LAMP 擴(kuò)增所需的所有成分， 可以用于實(shí)時熒光 RT-LAMP 等溫擴(kuò)增。 RT-LAMP 即 Revers Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification（逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增），它利用 4 條模板專一的特異引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和具有鏈置換能力的 Bs DNA 聚合酶，在等溫條件下(65℃左右)30－60 分鐘完成逆轉(zhuǎn)錄和 LAMP 擴(kuò)增該技術(shù)在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標(biāo)上能媲美甚至優(yōu)于定性 RT-PCR 技術(shù)，還不需要昂貴的儀器設(shè)備。目前已成功應(yīng)用于生物的快速檢測，廣泛用于各  個領(lǐng)域。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，含有 LAMP 專用的熒光染料，可以進(jìn)行實(shí)時熒光檢測（需要熒光 PCR 儀），但不建議用于定量分析。

2.含 UNG 防污染系統(tǒng)。

3.高特異性，精心優(yōu)化的配方，非特異擴(kuò)增比自配的試劑更低。

4.高擴(kuò)增效率，一般比 RT-PCR 靈敏一個數(shù)量級。

5.65℃左右同時完成逆轉(zhuǎn)錄和等溫擴(kuò)增，一步式操作。

6.本試劑盒足夠 50 次 20 ?L 體系的實(shí)時熒光 RT-LAMP 擴(kuò)增。

7.提供擴(kuò)增對照，便于在遇到困難時分析原因。

8.20 ?L 體系最多可以使用 13 ?L 樣本，減少漏檢。

9.UNG RT-LAMP MasterMix（熒光染料法）只能用于科研，不能用于臨床。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成份規(guī)格包裝

UNG RT-LAMP MasterMix

（熒光染料法，待加酶）200 ?L0.5 mL 黃蓋管

逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液100 ?L0.5 mL 紅蓋管

LAMP陽性對照模板-引物混合物

22040250 ?L0.5 mL 藍(lán)蓋管

超純水，PCR 級1 mL1.5 mL 本色蓋

石蠟油，PCR 級1.5 mL1.5 mL 本色蓋

使用手冊1 份無

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

RNA 模板、RT-LAMP 引物

使用方法：

1. 制備模板RNA：用于選用合適的方法制備模板RNA。如果有N個樣品，最好設(shè)置N+2個樣品制備，多出的兩個一個是樣品制備陽性對照，一個是樣品制備陰性對照。

2.配制20×RT-LAMP引物混合液。

先加超純水將合成的HPLC級別的下列引物干粉稀釋到下表所標(biāo)注的母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水，

最后得到0.1 mL的20×RT-LAMP引物混合液，此混合液足夠100次20 ?L體系的RT-LAMP擴(kuò)增。如果需要配制的20×RT-LAMP引物混合液體積異于0.1 mL，則各成分的用量請按比例調(diào)整。引物混合液可以在-20℃放置2 年。

注：如果沒有Loop引物，則用水替代。

3.在冰上融化RT-LAMP MasterMix（熒光染料法，待加酶），混勻，稍離心。第一次使用時，請將100 ?L逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix中并輕柔顛倒混勻1分鐘，然后再使用。如果有N個樣品，則在

N+2個反應(yīng)管中加入以下組份， 多出的一管是RT-LAMP擴(kuò)增陽性對照

（PC），一管是RT-LAMP擴(kuò)增陰性對照（NC）：

成份N+2 個樣品管RT-LAMP

擴(kuò)增 PCRT-LAMP

擴(kuò)增 NC

UNG RT-LAMP MasterMix

（熒光染料法，加酶后）6 ?L6 ?L6 ?L

自備 20×RT-LAMP

引物混合液1 ?L不加1 ?L

陽性對照模板-引物混合物不加4 ?L不加

自備 RNA 模板1-13 ?L不加不加

補(bǔ)自備超純水到20 ?L20 ?L20 ?L

4.混勻，放熒光定量PCR儀器上65℃保溫90分鐘，每分鐘采集一次SYBR通道的熒光信號。

5.反應(yīng)結(jié)束后，按下面的步驟處理和分析數(shù)據(jù)。

6.閾值的設(shè)定：LAMP 的閾值跟 LAMP 引物的專一性密切相關(guān)，因此新設(shè)計的引物需要先在不加模板的情況下進(jìn)行 LAMP 擴(kuò)增，測定其 Ct。Ct 最好沒有，如果有也最好不要低于 60（每分鐘采集一次熒光信號的話）。如果低于 60，則最好重新設(shè)計引物。

7.實(shí)驗(yàn)有效性的判斷：如果閾值設(shè)定為 60，則樣品制備陽性對照和擴(kuò)增陽性對照的 Ct 應(yīng)該在 60 以內(nèi)，樣品制備陰性對照、無模板陰性對照和無引物無模板陰性對照的 Ct 應(yīng)該大于 60，否則提取實(shí)驗(yàn)或擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)無效。對無效的實(shí)驗(yàn)不需要分析樣品的結(jié)果，需要尋找原因或跟廠家聯(lián)系。

8.如果實(shí)驗(yàn)有效，則可以分析樣品的數(shù)據(jù)。樣品 Ct 小于閾值則判讀為陽性，大于閾值則判讀為陰性。

選擇我們的UNG RT-LAMP MasterMix（熒光染料法），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！