熒光檢測器是液相色譜系統(tǒng)的“眼睛”，測量離開柱的樣品的濃度或質(zhì)量。光電檢測器測量柱流出物的光吸收、熒光和折光率的變化。電化學和電導檢測器溶液的變化。其靈敏度在目前常用的HPLC檢測器中高，在HPLC中應用較多。能發(fā)射熒光的物質(zhì)或能用柱前或柱后衍生法轉(zhuǎn)變成熒光衍生物的物質(zhì)均可以使用熒光檢測器進行分析。
激發(fā)波長和發(fā)射波長是熒光檢測的必要參數(shù)。選擇合適的激發(fā)波長和發(fā)射波長，對檢測的靈敏度和選擇性都很重要，尤其是可以較大程度地提高檢測靈敏度。
熒光屬于光致發(fā)光，需選擇合適的激發(fā)光波長(Ex)以利于檢測。激發(fā)波長可通過熒光化合物的激發(fā)光譜來確定。激發(fā)光譜的具體檢測辦法是通過掃描激發(fā)單色器，使不同波長的入射光激發(fā)熒光化合物，產(chǎn)生的熒光通過固定波長的發(fā)射單色器，由光檢測元件檢測。zui終得到熒光強度對激發(fā)波長的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的zui大波長處，處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目zui多，即所吸收的光能量也zui多，能產(chǎn)生zui強的熒光。當考慮靈敏度時，測定應選擇zui大激發(fā)波長。
一般所說的熒光光譜，實際上僅指熒光發(fā)射光譜。它是在激發(fā)單色器波長固定時，發(fā)射單色器進行波長掃描所得的熒光強度隨熒光波長(即發(fā)射波長，Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì)，并作為熒光測定時選擇合適的測定波長的依據(jù)。
22