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淋洗液在線發(fā)生-離子色譜法-脈沖安培檢測蒸餾白酒中氰化物

閱讀:1121      發(fā)布時間:2017-5-2
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引言 :藍藻,又名藍綠藻或藍細菌。一般認為,藍藻是地球 上早進行光合放氧的生物。藍藻可以進行光合作用,與 高等植物葉綠素具有一定程度上的同源性,加上其研究體 系簡單,長期以來一直是研究光合作用的模式生物。除此 之外,藍藻還可以進行固氮作用,將大氣中的氮氣經固氮 作用轉化為可以利用的氮源,用于提高土壤的肥力。隨著 人們對于光合作用認識的加深,以及對自身生活環(huán)境狀況 的重視,加上藍藻遺傳體系簡單、生長速度快、培養(yǎng)方便 等,相關方面的研究已經引起越來越多的重視,藍藻已經 成為一種重要的生理生化應用研究模式生物。由于藍藻具 有高光效、生長速度快、遺傳操作體系相對成熟,適用大 通量的基因工程改造等一系列傳統優(yōu)勢,因此,如果可以 通過代謝工程改造藍細菌生產蔗糖并提供給大腸桿菌等微 生物發(fā)酵生產生物燃料,必將加速整個生物燃料的產業(yè)化 進程,具有顯著的意義。我們通過此種方法測定藍藻發(fā)酵 液中的一些成分,如蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、葡萄 糖甘油酯、甘露糖、果糖等,有利于了解其基因改造效 果,對于充分利用藍藻意義重大。 本實驗采用離子色譜質譜聯法分離測定7種糖,分離 度好,靈敏度高,操作簡便,建立了一種有效檢測藍藻發(fā) 酵液中游離糖的方法。

 

測試條件: 儀器:ICS-4000色譜儀(Thermofisher公司),配四 元梯度泵,AS-AP自動進樣器, MSQ單四極質譜(ESI源) 色譜柱:CarboPac PA 20 保護柱6.5 µm, 35×0.4 mm,( P/N: 072073) CarboPac PA 20 分離柱6.5 µm, 150×0.4 mm,( P/N: 072072) 柱溫:30℃; 淋洗液:KOH等度淋洗流速:10 µL /min; 定量環(huán):0.4 µL; 檢測方式:質譜檢測(正離子模式加鈉峰) 質譜條件:柱后加液NaAC (1 mmol/L) : 乙腈(50 :5 0), 流速20 µL/min 

 

樣品前處理 取發(fā)酵液樣品,于離心機中離心20分鐘(3000 rpm), 上清液稀釋適當倍數后,過RP柱和0.22 µm尼龍濾膜過 濾,取續(xù)濾液直接上機分析。 結果和討論 色譜柱的選擇及淋洗液梯度條件優(yōu)化 在常規(guī)離子色譜上CarboPac PA 20的糖柱上采用 NaOH/NaOAc梯度淋洗的方式,能夠將上述7種糖*分 離,且色譜行為良好,在ICS 4000單泵條件下,也可利 用KOH梯度將上述幾種糖分離,但其分析和平衡時間較 長。在質譜條件下可利用分子量的不同,選擇不同的離子通道對7種糖進行定性和定量。為了保證色譜峰的分離度 和保留時間的合理性,我們選擇CarboPac PA 20的糖柱 和KOH等度淋洗的方式。 在上述色譜條件下7種糖的色譜 圖如下圖(圖1. 總離子流圖,圖2. SIM圖)。

線性和靈敏度 將標準品定量混合,并將標準品溶液稀釋得到一濃度 系列,對上述系列濃度各測定,以峰面積為縱坐標,標準 液質量濃度為橫坐標建立標準工作曲線,以葡萄糖甘油酯 為例,其在0.02 mg/L 10 mg/L范圍內線性良好,其回歸 方程、相關系數如表1所示。

 

 結論: 離子色譜分離脈沖安培檢測器測定糖分離度好靈敏度 高,在糖類物質的研究中應用非常廣泛。毛細管離子色譜 常用色譜柱直徑為0.4 mm,流速為10 µL/min,其進樣體 積通常為0.4 µL,與常規(guī)分析型離子色譜相比,其靈敏度 是常規(guī)離子色譜的近百倍,且。毛細管離子色譜的流速 是10 µL/min,符合質譜對低流速的需求;且經過抑制器 后,淋洗液中的鉀離子被交換到廢液中,進入質譜的流動 相基本為水,與質譜具有很好的兼容性,在需要進行定性 研究時可連接質譜。并且在進入質譜前,可以通過一個三 通引入部分乙腈以增加質譜的霧化效率,增加儀器的穩(wěn)定 性。本方法在柱后乙腈溶液中添加了少量乙酸鈉,以提高 糖在質譜中的重現性。毛細管離子色譜質譜聯用測定糖方 法操作簡便,重復性好,線性范圍內相關性好,準確度 高,進一步拓展了毛細管離子色譜的應用范圍,具有較高 的實用價值。

 

參考文獻 [1] Mou S F, Liu K N, Ding X J. Ion Chromatographic Method and Its Appliction. 2nd ed. Beijing: Chemical Industry Press (牟世芬,劉克納,丁曉 靜. 離子色譜方法及應用,第2版.北京:化學工 業(yè)出版社),2005:76,140,154 [2] González-Noriega A, Michalak C, Antonio Sosa Melgarejo J. Biochim. Biophys. Acta, Mol. Cell Res., 2005, 1745( 1): 7 [3] Mou S F, Yu H, Cai Y Q. Chinese Journal of chromatography(牟世芬 于泓 蔡亞岐. 色譜), 2009, 27(5): 667 [4] Fan L, Xu Y, Lian Z N, et al. Chinese Journal of chromatography(范麗,徐勇,連之娜等. 色譜), 2011, 29(1): 75

 

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