藥品雜質(zhì)是反映藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)，人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議（Internat ional Conference of Harmonizition ICH）要求：表觀含量>0.1%的雜質(zhì)應(yīng)進(jìn)行定性分析；常規(guī)的雜質(zhì)定性分析方法通常采用分離制備雜質(zhì)純品，再進(jìn)行波譜學(xué)方法解析。
近年來(lái)，越來(lái)越多的利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析有關(guān)物質(zhì)的含量及定性。但目前藥典中很多的有關(guān)物質(zhì)分析的方法，均采用非揮發(fā)性緩沖鹽，甚至添加了離子對(duì)試劑作為流動(dòng)相，因此不能直接進(jìn)入質(zhì)譜分析，給雜質(zhì)定性帶來(lái)了很大的挑戰(zhàn)，導(dǎo)致應(yīng)用出現(xiàn)局限性。本方法介紹了采用柱切換二維液相色譜分離-質(zhì)譜定性的方法，來(lái)解決此類問題，對(duì)一維上洗脫下來(lái)的雜質(zhì)等目標(biāo)化合物經(jīng)過閥切換至二維色譜柱，在二維色譜柱上進(jìn)行除鹽后，再進(jìn)質(zhì)譜進(jìn)行定性分析，通過質(zhì)譜裂解規(guī)律，尋找雜質(zhì)可能產(chǎn)生的來(lái)源以及形成的機(jī)理，取得了較好的效果。本實(shí)驗(yàn)儀器連接圖見圖2-14
頭孢地尼，屬第3代頭孢，其結(jié)構(gòu)見圖2-13。膠囊劑：50 mg/粒，100 mg/粒，由日本藤澤藥品工業(yè)公司原研，1991年日本上市，商品名Cefzon，1997年12月被美國(guó)上市，1999年在韓國(guó)上市，2001年國(guó)產(chǎn)頭孢地尼獲準(zhǔn)在中國(guó)上市。該品用于對(duì)頭孢地尼敏感的葡萄球菌屬、鏈球菌屬、肺炎球菌、消化鏈球菌、丙酸桿菌、淋病奈瑟氏菌、卡他莫拉菌、大腸埃希菌、克雷伯菌屬、奇異變形桿菌、普魯威登斯菌屬、流感嗜血桿菌等菌株所引起的感染。
一維分析柱：Acclaim 120 C18，5 µm，4.6×150 mm，P/N：059148；二維色譜柱：Acclaim PAII，3 µm，3.0×50 mm， P/N：068973MS工作參數(shù)：1） Full Scan，ESI源，正離子模式，M/Z: 100-600；負(fù)離子模式：100-600；Scan time 0.4S。2） 子離子掃描（母離子根據(jù)full scan掃描得到）：正負(fù)離子同時(shí)掃描，F(xiàn)ull scan M/Z=100-600，Scan time 0.2s，F(xiàn)WHM 0.70，CE 10V，Energy Ramp: 40eV3）調(diào)諧參數(shù)：電壓：2200 V；霧化溫度：350℃；鞘氣壓力：35 psi；輔助氣壓力：10 psi；毛細(xì)管溫度：300℃。
一維分析流動(dòng)相（右泵），梯度程序見表2-9：流動(dòng)相A：0.25%四甲基氫氧化銨溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH=5.5）1000 mL，加入0.l mol/L乙二胺四醋酸二鈉溶液0.4 mL；流動(dòng)相B：0.25%四甲基氫氧化銨溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH=5.5）-乙睛-甲醇=500-300-200，加入0.1 mo1/L乙二胺四醋酸二鈉溶液0.4 mL。二維分析流動(dòng)相（左泵），梯度程序見表2-10：A：0.005 mol/L醋酸銨，pH用乙酸調(diào)節(jié)至5.5；B：乙腈。閥切換時(shí)間見表2-11，測(cè)定譜圖見圖2-15、2-16。柱溫：40℃；進(jìn)樣體積：20.0 µL；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。
根據(jù)破壞樣品紫外譜圖，發(fā)現(xiàn)熱破壞雜質(zhì)峰更多，因此，選用熱破壞樣品進(jìn)行雜質(zhì)分析。從圖可以看出，9號(hào)峰為主峰頭孢地尼，其他峰為雜質(zhì)峰，分別對(duì)6、7、9、10、12、15號(hào)峰等進(jìn)行了閥切換，把每個(gè)峰先切到定量環(huán)里，然后再啟動(dòng)左泵洗脫除鹽后，進(jìn)質(zhì)譜分析。圖2-16為質(zhì)譜上進(jìn)樣閥除鹽切換時(shí)間試驗(yàn)圖譜。從圖2-16可以看出，上圖為負(fù)離子模式，M-H為291.1，是EDTA鹽；正離子模式下，M+H 74.1為四甲基氫氧化銨鹽，因此，要把流動(dòng)相中的鹽去除干凈，需要找到合適的質(zhì)譜上的進(jìn)樣閥的切換時(shí)間，把這兩個(gè)峰進(jìn)行切除，流入廢液。在本試驗(yàn)中，質(zhì)譜進(jìn)樣閥的切入時(shí)間約為4.0 min（以六通閥切換進(jìn)樣后開始計(jì)算）。通過該方法，對(duì)每一個(gè)雜質(zhì)進(jìn)行單獨(dú)切換后，通過定量環(huán)轉(zhuǎn)移至二維色譜柱上，再采用與質(zhì)譜兼容的流動(dòng)相，把二維色譜柱上保留的鹽份去除掉，然后把目標(biāo)化合物洗脫下來(lái)，進(jìn)質(zhì)譜分析，該方法取得了較好的結(jié)果，解決了相關(guān)難題，最終分析結(jié)果見下表
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