前言在臨床檢驗應用中能夠準確檢測出血中鉛含量的的儀器是保障職業(yè)安全和公共衛(wèi)生的可靠支持。美國疾病預防控制中心(CDC)規(guī)定血中鉛含量不得高于10 μg/dL[1]。但是,目前還不知道究竟血中鉛濃度達到多少會對人體產(chǎn)生危害,在臨床檢驗應用時能夠提供準確數(shù)值和精確測量的儀器也是很重要的。在臨床檢驗應用中采用橫向加熱技術石墨爐和塞曼效應背景校正測定血中鉛原子吸收應 用 文 章臨床檢驗測定全血一般采用石墨爐原子吸收光譜法(GFAAS)。GFAAS具有成本效益,其檢出限遠低于CDC規(guī)定血鉛濃度水平,而且相比于其他更先進的元素分析技術,GFAAS對操作人員的要求更低[2]。在本研究中,我們將對使用恒溫平臺石墨爐 (STPF)和橫向加熱石墨管(THGA)技術的PerkinElmer® PinAAcle™ 900T原子吸收光譜儀在臨床檢驗中測定血液樣品中鉛含量的應用性進行驗證。試驗為了簡化和減少分析時間,沒有使用與樣品基體匹配的血液標準和標準加入法制作校準曲線,而采用水標準溶液。
實驗試劑準備所有試劑、標準和樣品均采用ASTM®I類去離子水(18MΩ • cm) 配制。濃硝酸(HNO3)(69-70%)為痕量金屬級或更高[3]。10% Triton® X-100儲備液:直接在125mL LDPE瓶中稱取10克Triton® X-100潤濕劑(Part No. N9300260),去離子水定容至100克,搖勻。自動進樣器清洗溶液:保證2L的自動進樣器清洗瓶中一直有去離子水,加入4mL濃硝酸和100 μL10%Triton® X-100溶液,搖勻。稀釋劑/基體改進劑溶液:吸取1mL10%磷酸二氫銨(NH4H2PO4,基體改進劑(Part No.N9303445)),加入到60mL LDPE瓶中,然后加入2.5 mL10% Triton®X-100儲備液和0.1 mL濃硝酸,最后用去離子水稀釋至50mL。1% HNO3溶液:在1L塑料容量瓶中先加入大約500mL去離子水,然后加入10mL濃硝酸,去離子水稀釋定容至刻度。標準溶液中間液(10 mg/L):吸取1mL1000mg/L鉛標準溶液儲備液(PerkinElmer Pure, Part No. N9300175)到125mLLDPE瓶中,用1% HNO3定容至100g。每月配制。
標準溶液配制和樣品處理在4個干凈的100mL塑料瓶中分別加入1, 2, 4, 6 mL10mg/L的標準溶液,然后用1% HNO3稀釋定容至刻度,則配制的二級標準溶液濃度分別為100, 200, 400, 和 600μg/L。校準曲線標準溶液:在4個1.2 mL干凈的自動進樣器樣品杯中分別吸取上述二級標準溶液各100μL,然后各加入900 μL稀釋劑/基體改進劑溶液。在自動進樣器樣品杯中用移液器槍頭反復吹打5-10次以混勻樣品杯中的溶液。空白溶液的配制使用1% HNO3溶液按相同步驟進行。樣品使用NIST®山羊血中微量元素(SRM955c)和LyphoChek全血金屬對照濃度1、2、3 (BioRad, 加州Hercules)。在1.2 mL自動進樣器樣品杯中直接吸取100 μL樣品和900μL稀釋劑/基體改進劑溶液,照上述方法混勻
儀器條件實驗所有的測量都使用PinAAcle 900T火焰和縱向塞曼石墨爐原子吸收光譜儀。光源使用PerkinElmerLumina™ Pb單元素空心陰極燈(Part No. N3050157),氣體類型為氬氣。PinAAcle 900T的儀器設置列于表1,所有樣品測定的石墨爐程序列于表2。
雖然本實驗校準曲線最大濃度做到60 μg/dL (圖 4a),但是研究發(fā)現(xiàn)儀器的線性可達到120μg/dL或者更高(圖4b)。這就為分析高濃度樣品時減少稀釋倍數(shù)提供了一種方法。多次測定血液稀釋溶液得到的檢出限約為0.23μg/dL (3SD)。由表3可見,測定4個濃度的NIST®標準物質(zhì)955c-山羊血中有毒金屬的回收率在98-102%范圍內(nèi);而由表4可見,測定3濃度BioRad LyphoChek比對樣品的回收率在100-106%范圍內(nèi)。所有實驗結(jié)果均在標準物質(zhì)推薦的范圍內(nèi)。
AS 900自動進樣器的使用保證了樣品傳輸?shù)臏蚀_性。AS 900自動進樣器探針在分析時不需要為了防止高濃度樣品對后續(xù)樣品的殘留污染而進行任何清洗或維護。而且能夠在需要時對超過校準曲線范圍的樣品進行自動稀釋。
結(jié)論本文介紹了如何利用我們的儀器在臨床檢驗中測定血中Pb含量的實例。通過使用帶有恒溫平臺石墨爐(STPF)、石墨爐橫向加熱(THGA)系統(tǒng)的PinAAcle900T原子吸收光譜儀,使得臨床檢驗中快速、準確測定Pb成為可能。較寬的線性范圍既能滿足測定遠低于臨界值10 μL/dL的樣品,也能滿足臨床和研究中測定較高濃度的需求。PinAAcle 900T原子吸收光譜儀非常適合臨床檢驗測定血中鉛含量。
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