免疫印跡又稱蛋白質(zhì)印跡，它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。
    言科生物根據(jù)多年的經(jīng)驗(yàn)選用了目前市場(chǎng)上質(zhì)量與口碑較好的試劑，為廣大的客戶提供的WB服務(wù)。費(fèi)用：每張膜1000元，客戶自己提供一抗，或者由我們公司代購(gòu)，常規(guī)二抗免費(fèi)提供，每張膜可以做6-8個(gè)樣品（各種陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照計(jì)入樣品數(shù)內(nèi)），承諾實(shí)驗(yàn)周期為2周。

主要實(shí)驗(yàn)步驟如下：
1、蛋白質(zhì)準(zhǔn)備；
2、蛋白質(zhì)定量；
3、變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳（SDS-PAGE）：將準(zhǔn)備好的樣品液和預(yù)染蛋白marker分別上樣，標(biāo)準(zhǔn)加進(jìn)*個(gè)孔中，電泳分離蛋白?！?
4、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜，按Bio-Rad蛋白轉(zhuǎn)移裝置說(shuō)明組裝濾紙凝膠纖維素夾層，30mA恒流條件下，4℃轉(zhuǎn)移過(guò)夜。
5、western blot膜的封閉和抗體孵育；
膜在5％脫脂奶粉溶液中室溫孵育1小時(shí)以封閉膜上的非特異結(jié)合。
封閉過(guò)的膜加入一抗室溫孵育1.5小時(shí)，抗原抗體結(jié)合。
加入HRP標(biāo)記的二抗體以結(jié)合一抗，室溫孵育膜1小時(shí)。加入HRP標(biāo)記的GAPDH抗體可同時(shí)檢測(cè)GAPDH含量。
6、western blot結(jié)果檢測(cè)：化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，膜與化學(xué)發(fā)光底物孵育，經(jīng)X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件，并用GIS1000分析軟件將圖片上每個(gè)特異條帶灰度值的數(shù)字化；
7、western blot數(shù)據(jù)分析：目的蛋白的灰度值除以內(nèi)參GAPDF的灰度值以校正誤差，所得結(jié)果代表某樣品的目的蛋白相對(duì)含量；
8、提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)數(shù)據(jù)。

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