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外標法檢測樣品中柚皮苷含量
閱讀：3049發(fā)布時間：2013-5-24
一、實驗方法
Cometro液相色譜系統(tǒng)；
色譜柱：Comasil C18 250*4.6mm，5μm；
流動相：甲醇-水=40:60；
紫外檢測器波長：283nm；
流速：1.0ml/min；
樣品：柚皮苷對照品（19.68μg/ml），樣品；
進樣量：對照品分別進樣2.5μl、4μl、5μl、6μl、7.5μl各5次，樣品進樣5μl，使樣品與標準品5:1混合再進樣5μl，考察線性相關性，保留時間重現(xiàn)性，峰面積重現(xiàn)性，回收率。
二、實驗結果與分析
1、對照品5μl
| Channel A Results | |||||
| Name | Retention Time | Area | Theoretical plates （USP） | Resolution （USP） | Asymmetry |
| 柚皮苷 | 18.477 | 89103 | 8137 | 0.00000 | 1.09209 |
附進樣量，保留時間，峰面積關系表：
| 進樣量/μl | 保留時間/min | 峰面積/mV*min |
| 2.5 | 18.386 | 42387 |
| 4 | 18.377 | 71244 |
| 5 | 18.477 | 89103 |
| 6 | 18.539 | 106504 |
| 7.5 | 18.501 | 134769 |
2、樣品5μl
| Channel A Results | |||||
| Name | Retention Time | Area | Theoretical plates （USP） | Resolution （USP） | Asymmetry |
| 柚皮苷 | 19.497 | 128002 | 8087 | 5.22515 | 1.05546 |
3、樣品與標準5:1混合后進樣5μl
| Channel A Results | |||||
| Name | Retention Time | Area | Theoretical plates （USP） | Resolution （USP） | Asymmetry |
| 柚皮苷 | 18.535 | 120336 | 7828 | 2.87114 | 1.03257 |
三、結果運算
1、保留時間重現(xiàn)性考察
| 保留時間 | 18.386 | 18.377 | 18.477 | 18.539 | 18.501 |
| RSD | 0.3747% | ||||
2、峰面積重現(xiàn)性考察
| 峰面積 | 89103 | 89105 | 88953 |
| RSD | 0.0979% | ||
3、線性相關性考察及樣品含量計算
以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，得線性方程：
由此可算出樣品含柚皮苷28.08μg/ml。
4、回收率考察：
根據(jù)上面線性方程可算出混合后樣品含柚皮苷26.43μg/ml，而實際真值是26.68μg/ml，因此得回收率為99.06%。
四、綜述
此四項考察綜合考察了檢測器的吸收穩(wěn)定性，泵的流量性，進樣閥、進樣針的性，Comasil色譜柱的性。
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