簡介

CCK8實驗，全稱Cell Counting Kit-8，是一種常用于細胞增殖和細胞毒性檢測的比色法。該實驗基于WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）的還原反應。在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liusuan二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下，WST-8被活細胞中線粒體中的脫氫酶還原形成橙黃色的甲瓚產物（Formazan dye）。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比，通過測定在特定波長（通常是450nm）處的吸光度（OD值），可以間接計算活細胞的數量。

CCK8實驗步驟

  1.細胞接種：將細胞接種到96孔板中，并在適宜條件下培養(yǎng)至適宜密度。

  2.藥物處理：向含有細胞的孔中加入不同濃度的待測物質。

  3.孵育：將培養(yǎng)板在細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間，以便藥物與細胞作用。

  4.添加CCK8：向每個孔中加入CCK8溶液，繼續(xù)孵育一段時間（通常為1-4小時）。

  5.檢測吸光度：使用酶標儀在450nm波長處測定各孔的吸光度值。

  6.數據分析：根據吸光度值計算細胞的相對生存分數或抑制率，并進行進一步分析。

注意事項

  1.實驗中應避免使用含有強還原劑的培養(yǎng)基，以免影響CCK8的檢測結果。

  2.實驗前應繪制標準曲線以校準細胞數量與吸光度值之間的關系。

  3.孵育時間應根據實驗具體情況調整，以確保OD值處于適宜范圍內。

  4.實驗操作應標準化，以保證結果的重復性和可比性。