細(xì)胞培養(yǎng)的路上，有多虐心就有多少要注意的地方。大家擦干眼淚，聽師姐幾句話。希望我所說的能幫助你細(xì)胞培養(yǎng)的路上，少一點(diǎn)污染，多一點(diǎn)快樂。

細(xì)胞方面

1. 買細(xì)胞要去靠譜的地方買，比如 ATCC 或者丁香通。一般上面會有針對細(xì)胞的介紹，這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。

2. 不管是買的細(xì)胞，還是別人惠贈的細(xì)胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染；迅速擴(kuò)增凍存，凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天更換一次培養(yǎng)基。

3. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉，特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時。細(xì)菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，支原體污染的話，細(xì)胞會長的慢，可以買個支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。

4. 不同細(xì)胞生長周期不同。有的生長很快，比如說 MDA-MB-231，傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢，比如 BT474，傳代是一分二，復(fù)蘇起始的時候兩周多才能長滿。這就需要要在培養(yǎng)細(xì)胞的過程中多多摸索。

5. 對于嬌弱的細(xì)胞，就得細(xì)心呵護(hù)。胰酶消化不能過久，吹得時候要輕柔，離心時候也要注意轉(zhuǎn)速和時間。每天都要去看一下細(xì)胞，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況。記住，是每天。

操作方面

1. 不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套。自己的東西自己包自己烘干。槍頭什么的只要有可能污染就換。

2. 嚴(yán)格無菌操作。操作臺一定要擺個酒精燈，所有操作緊密圍繞在酒精燈周圍進(jìn)行。離開過操作臺的東西再進(jìn)操作臺之前一定要用酒精消毒一遍，稍微烤一下，別直接放到火上，離一段距離。包括一切實(shí)驗(yàn)耗材、儀器、以及你帶著手套的手。

3. 水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，記得要勤換。身體的各個部分盡量的少接觸不需要接觸的地方的地方。比如實(shí)驗(yàn)臺，又比如培養(yǎng)箱內(nèi)部。培養(yǎng)箱隔一段時間*用酒精棉擦洗一次。

4. 細(xì)胞房日常的值日清潔是必須的，此外還要定期熏蒸。晚上離開的時候給細(xì)胞房照紫外，超凈臺是用完就開。的是同一時間就你一個人在細(xì)胞房養(yǎng)細(xì)胞。

5. 動作要既輕柔又有力。動作太重會有一堆一堆的氣泡，動作太輕就吹不下來。剛開始的時候吹細(xì)胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后來就是吹的時候槍里的培養(yǎng)基不要一次全都壓出來，留一點(diǎn)，槍的zui頭部盡量深的在液面以下。