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植物幾丁質(chitin)Elisa試劑盒說明書

來源:上海繼錦化學科技有限公司   2016年12月22日 15:16  

本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷
植物( Plant ) 幾丁質( chitin ) ELISA  檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預
先包被幾丁質(chitin)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、
HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB
在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的
黃色。顏色的深淺和樣品中的幾丁質(chitin)呈正相關。用酶標儀
在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化
物酶(HRP)的抑制劑。
2. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行。
3. 植物萃取液或其它相關樣本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即
可檢測。
4. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于
-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶*溶解
后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明
書操作時樣本已經稀釋 5 倍,zui終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱 6 96  孔配置 8 48  孔配置 備注
微孔酶標板 12 孔×8 條 12 孔×4 條 無
標準品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 無
樣本稀釋液 6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物 A 6mL 3mL 無
底物 B 6mL 3mL 無
終止液 6mL 3mL 無
封板膜 2 張 2 張 無
說明書 1 份 1 份 無
自封袋 1 個 1 個 無
注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、50、100、200、400、800 ng/mL
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即 1 份的 20×洗滌緩
沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置 1min 后甩盡
孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5 次。
2. 自動洗板機:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封
袋密封放回 4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL;
3. 樣本孔先加待測樣本 10μL,再加樣本稀釋液 40μL;空白孔不
加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
(HRP)標記的檢測抗體 100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴
鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 1min,甩去
洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板 5 次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL,15min 內,在 450nm 波長處測定各孔的
OD 值。
結果判斷
繪制標準曲線:在 Excel 工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應
OD 值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣
本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值,大于等于
0.9900。
2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于 10 ng/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性:板內、板間變異系數均小于 15%。
5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6 個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所
產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。
2. 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者
承擔。

免責聲明

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