基因組DNA抽提

來源：上海銳谷生物科技有限公司 2010年12月09日 15:55

. 基因組DNA降解

（1）樣品不新鮮：雖然DNA在分子結(jié)構(gòu)上較RNA穩(wěn)定，但樣品在分離后細胞內(nèi)的DNA酶同樣會作用于DNA分子。

（2）樣品本身富含DNA酶；

2. 得率低或無基因組DNA

（1）DNA未充分釋放：在分離到的相間沉淀中加Buffer G-A后未充分振蕩釋放DNA。

（2）Buffer W2中未加入無水乙醇：未加乙醇的Buffer W2是一種低鹽溶液，可溶解DNA。若直接用于洗滌DNA-prep Tube將會溶解并去除結(jié)合在silica膜上的DNA。

（3）DNA未充分洗脫：用于洗脫DNA的Eluent或去離子水應(yīng)在使用前預(yù)熱至65℃，其體積不應(yīng)小于60 μl。

3. RNA污染

在Buffer R-C分相后分離相間沉淀的時，未將下相（含RNA）*去除。

4. 生物學活性差

（1）DNA中鹽分含量高：Buffer W1含高濃度鹽離子，后續(xù)的Buffer W2洗滌是為去除鹽分設(shè)計的。操作時按說明書的參數(shù)用Buffer W2洗滌DNA-prep Tube。

（2）DNA中含乙醇：使用前用戶已在Buffer W2中加入乙醇，若洗滌時不嚴格按照說明書提供的實驗參數(shù)進行操作可能會有乙醇殘留在silica膜上。

出現(xiàn)問題的原因分析及解決方法

可能出現(xiàn)的問題	可能原因	建議
結(jié)合柱阻塞	殘留細胞碎片	沉淀之后，確保無原材料顆粒一起被轉(zhuǎn)移。
	在把試樣轉(zhuǎn)移至結(jié)合柱上時，DNA團還沒有*溶解	在加入乙醇之前，確保DNA已經(jīng)*溶解。這可能需要再次在65℃下水浴及旋渦振蕩。
	樣品太黏滯	起始原料的量不要超過建議量,或者增加試劑量,并且每個樣品用2個個或以上的結(jié)合柱。
	沉淀不*	沉淀后，增加離心的轉(zhuǎn)速或時間。
低DNA量	原材料沒有充分研碎	無論是干的樣品還是新鮮樣品，在加入Buffer P1之前，均要把它們制成均勻的粉粒。
	組織細胞溶解不好	減少原材料的量，或增加試劑的量。
	DNA仍然結(jié)合在結(jié)合柱上	把洗脫液的體積增加到200μl，并在離心之前把整個包著柱的離心管在65℃下水浴5min。
	DNA被洗掉了	在洗滌之前，加入適當體積的無水乙醇以沖稀Wash Buffer的濃度。
以后的應(yīng)用中出現(xiàn)的問題	殘留鹽	Wash Buffer必須在室溫下保存。
以后的應(yīng)用中出現(xiàn)的問題	殘留乙醇	在第二次離心洗滌后，確保結(jié)合柱在極速離心2min的情況下已經(jīng)干了。

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