1．動物的選擇 純種BALB／C小鼠較溫順，離窩的活動范圍小，體弱，食量及排污較小，一般環(huán)境潔凈的實驗室均能飼養(yǎng)成活。目前開展雜交瘤技術(shù)的實驗室多選用純種BALB／C小鼠。
2．免疫方案 免疫方案應根據(jù)抗原的特性不同而定，選擇合適的免疫方案對細胞融合雜交的成功，并獲得高質(zhì)量的McAb至關(guān)重要。一般在融合前兩個月左右根據(jù)確立免疫方案開始初次免疫。對抗原的要求是純度越高越好，尤其是對于初次免疫所用的抗原。如為細胞抗原，可取1．0X107個細胞作腹腔免疫?？扇苄钥乖杓?福氏佐劑并經(jīng)充分乳化。如為聚丙烯酰胺電泳純化的抗原，可將抗原所在的電泳條帶切下，研磨后直接用于動物免疫。
（1）可溶性抗原免疫原性較弱，一般要加佐劑，半抗原應先制備免疫原，再加佐劑。常用佐劑有福氏*佐劑、福氏不*佐劑，方法如下。
初次免疫 抗原l～50pg加福氏*佐劑
皮下多點注射或脾內(nèi)注射
（一般0．8～1ml，0．2ml／點）
↓3周后
第2次免疫 劑量同上，加福氏不*佐劑
皮下或腹腔內(nèi)注射
（腹腔內(nèi)內(nèi)注射，腹腔內(nèi)注射劑量不宜超過0．5m1）
↓3周后
第3次免疫 劑量同上，不加佐劑，腹腔內(nèi)注射
（5～7d后采血測其效價）
↓2—3周
加強免疫，劑量50～500~g為宜
腹腔內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射
（靜脈內(nèi)注射）
↓3d后
取脾融合
目前，用于可溶性抗原（特別是一些弱抗原）的免疫方案也在不斷更新，如：①將可溶性抗原顆?；蚬滔嗷环矫嬖鰪娏丝乖拿庖咴?，另一方面可降低抗原的使用量。②改變抗原注入的途徑，基礎免疫可直接采用脾內(nèi)注射。③使用細胞因子作為佐劑，提高機體的免疫應答水平，增強免疫細胞對抗原的反應性。
（2）顆?？乖庖咝詮姡患幼魟┚涂色@得很好的免疫效果。以細胞性抗原為例，免疫時要求抗原量為（1～2）X107個細胞。
初次免疫1X107／0．5ml腹腔內(nèi)注射
↓2～3周后
第2次免疫lXl07／0．5ml腹腔內(nèi)注射
↓3周后
加強免疫（融合前3d）lXl07／0．5ml
腹腔內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射
取脾融合
免疫過程和方法與多克隆抗血清制備基本相同，因動物、抗原形式、免疫途徑不同而異，以獲得價抗體為zui終目的。免疫間隔一般2—3周。一般被免疫動物的血清抗體效價越高，融合后細胞產(chǎn)生價特異抗體的可能性越大，而且單克隆抗體的質(zhì)量（如抗體的濃度和親和力）也與免疫過程中小鼠血清抗體的效價和親和力密切相關(guān)。末次免疫后3～4d，可分離脾細胞融合。