手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
吖啶橙熒光染色法基本原理：
吖啶橙（acridine orange，AO）是一種常用熒光染料，吖啶橙與原代細胞內的DNA、RNA都有親和力，但有一定的特異性，即結合后發(fā)不同顏色的熒光，DNA呈亮綠色，而RNA呈橘紅色至火紅色。此法簡便快捷，既可染活原代細胞又可染固定原代細胞。用于直接染色觀察活原代細胞或固定染色觀察原代細胞均可。吖啶橙對活原代細胞毒性小，配成1×10-4-2×10-4可用于直接染色活原代細胞和進行熒光顯微鏡觀察，但不持久，用固定染色觀察法效果更好。
材料：
1.蓋片單層培養(yǎng)原代細胞；
2.固定劑：95%乙醇或乙酸/甲醇（現(xiàn)配）；
3.吖啶橙：用生理鹽水配成1%的干液。使用時再用PBS稀釋成1×10-4-2×10-4mol/L pH4.5-5.0的染色液；
4.0.1mol/L的CaCl2；
5.1%乙酸。
染色步驟：
1.將蓋片單層培養(yǎng)原代細胞從瓶中取出，立即用溫Hanks液漂洗3-5s，以去除培養(yǎng)基中血清；
2.投入95%乙醇或乙酸/甲醇固定15-30min，用濾紙接觸蓋片邊緣，蓋片微干；
3.用1%乙酸酸化30s；
4.用1×10-4-2×10-4的吖啶橙染液染色30s或1min；
5.用0.1mol/L的CaCl2處理30s-2min；
6.PBS漂洗3次，每次數(shù)秒；
7.PBS封片，熒光顯微鏡下直接觀察并拍照；
8.注意事項：觀察中應隨時填加PBS以避免標本干涸。如用油浸鏡觀察，需再覆以大蓋片蓋在附有原代細胞蓋片上，保證原代細胞面朝上，用無熒光性油浸鏡觀察。原代細胞蓋片標本在95%乙醇中能保存數(shù)日后仍可觀察，如退色，再用AO染色。鏡下觀察，DNA呈翠綠色，RNA呈火紅色。 結果：原代細胞核因含DNA呈綠色，細胞質及核仁因含RNA呈紅色。
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
- 本網(wǎng)轉載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
采購中心