經(jīng)驗分享:
1.原代細胞鋪満瓶底后棄原液,PBS沖洗2次。
2.加入0.25%Trypsin-0.02%EDTA,量覆蓋瓶底即可,室溫作用,鏡下觀察至組織塊周圍的細胞回縮,立體感增強。
3.棄去消化液,PBS輕漂一遍(目的是除去EDTA,它對脆弱的原代細胞很不好)但不要用力搖晃,以免部分消化稍過的細胞流失。
4.加入培養(yǎng)液吹打,不要產(chǎn)生氣泡,對細胞有損。
5.吸出2/3的懸液傳入新瓶。
6.向原瓶中余下的1/3細胞懸液中補加2/3的新培養(yǎng)液,與未消化的組織塊繼續(xù)培養(yǎng)。
7. 24小時內新的細胞又從組織塊中爬出啦,等鋪滿后再如上所述做一次吧。
注:
1.只有當原代培養(yǎng)時組織塊較多時才這樣做,否則得不償失。
2.保留1/3的細胞是為了讓余下的組織塊在細胞間作用下迅速健康的生長。
3.一瓶細胞以此法處理不要超過3次。
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