1. 樣品均勻化 

對(duì)于生物樣品，應(yīng)在測(cè)定前混合均勻，以免造成測(cè)定誤差?？芍脺u流混合器上混勻，血漿樣品往復(fù)振搖亦可達(dá)到均勻化的目的。 

對(duì)糞便、肌肉和組織等固體樣品都存在均勻化這一問(wèn)題。對(duì)含有不溶性組分的樣品（例如組織和糞便），須將樣品進(jìn)行勻漿處理，以保證樣品的均勻性。同時(shí)還應(yīng)注意取樣的代表性問(wèn)題。 

2. 去蛋白處理 

生物樣品如血漿、血清等含有大量的蛋白質(zhì)，它們能結(jié)合藥物，因此對(duì)于某些藥物的測(cè)定，必須先將與蛋白結(jié)合的藥物游離之后再作進(jìn)一步處理。通常去蛋白過(guò)程是將蛋白質(zhì)變性處理后，把與蛋白結(jié)合的藥物解離出來(lái)，離心分離以除去蛋白。 

目前已有很多去蛋白方法可供使用，但使用各種方法之前應(yīng)了解該方法是否會(huì)導(dǎo)致生物樣品中的藥物發(fā)生分解或影響藥物的提取等。

通常除蛋白的方法是在含蛋白樣品中加入適當(dāng)?shù)某恋韯┗蜃冃詣?，使蛋白質(zhì)脫水而沉淀（如有機(jī)溶劑、中性鹽），有的是由于蛋白質(zhì)形成不溶性鹽而析出（如高氯酸），離心后取上清液用于分析。甲醇、乙腈、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有機(jī)溶劑，中性鹽可用氯化銨等。無(wú)機(jī)鹽沉淀蛋白是可逆的，即將蛋白稀釋后仍具有生理活性，而有機(jī)溶劑和酸類沉淀的蛋白是不可逆的。也可用透析法與超濾法除去樣品中蛋白。

3. 被測(cè)組分的提取 

生物樣品中被測(cè)組分一般需提取后才能進(jìn)行色譜分析，這一步驟包含了樣品的凈化與濃縮。提取方法和提取條件的選擇是分析方法研究的重要內(nèi)容之一，它與分析方法的選擇性、精密度和準(zhǔn)確度緊密相關(guān)。 

3.1 液-液提取 

液-液提取是經(jīng)典的提取方法之一，它基于被測(cè)組分在不相混溶的兩種溶劑中的分配。在提取過(guò)程中，水相的pH是重要的參數(shù)；一般弱酸性藥物可加入一定量的酸，弱堿性藥物可加入一定量的堿，使藥物以分子狀態(tài)存在，有利于有機(jī)溶劑的提取效果；在液質(zhì)聯(lián)用中，必須使用可揮發(fā)性的酸和堿，如鹽酸、甲酸、乙酸、氨水等。有時(shí)加入一些強(qiáng)離子的無(wú)機(jī)鹽（如氯化鈉）， 利用鹽析作用，能促進(jìn)組分進(jìn)入有機(jī)相。

通過(guò)選擇不同的有機(jī)溶劑可提高選擇性。一般可選用乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、氯仿、正己烷、甲基叔丁基醚、甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑及其不同比例的混合物進(jìn)行提取。

液-液提取可用于水為基質(zhì)的樣品中非極性或弱極性組分的提取，液液提取可用氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)捎门c色譜方法相適應(yīng)的溶劑溶解后進(jìn)樣。 

液-液提取有時(shí)會(huì)發(fā)生乳化現(xiàn)象以及被測(cè)組分損失。為了防止乳化，可應(yīng)用較大體積的有機(jī)溶劑，避免猛烈振搖或加入適當(dāng)?shù)脑噭└淖兤浔砻鎻埩Χ迫?，若已發(fā)生嚴(yán)重的乳化現(xiàn)象，可將試管置于冰箱中冷凍破乳。 

萃取過(guò)程中所用的玻璃容器壁對(duì)某些藥物的吸附是不可忽略的，特別是當(dāng)藥物濃度較低時(shí)更是如此。可使用經(jīng)硅燒化處理的器具，同時(shí)萃取劑中加入異戊醇也可減少玻璃壁的吸附，還可減少萃取過(guò)程中乳化的形成。

兩性藥物或水溶性很強(qiáng)的藥物不能用一般的溶劑萃取法將它們自體液介質(zhì)中萃取出來(lái)，通?？捎秒x子對(duì)萃取法。針對(duì)呈解離狀態(tài)的藥物，可以加入反離子來(lái)形成離子對(duì)絡(luò)合物，再用有機(jī)溶劑萃取出來(lái)。一般堿性藥物用十二烷基磺酸類（RSO3H）作為反離子，其他有戊烷磺酸、己烷磺酸、庚烷磺酸、辛烷磺酸等；酸性藥物可用烷基季銨類化合物（R4N+X-）作為反離子，如四丁基銨、四乙基銨、四辛基銨等。形成離子對(duì)后可用相應(yīng)有機(jī)溶劑提取。 

3.2 固相分離 

固相分離又稱為固相提取柱法，其常用的柱填料有吸附劑、高分子大孔樹(shù)脂、離子交換樹(shù)脂、鍵合硅膠等。

固相分離有兩種實(shí)現(xiàn)樣品純化的途徑。一種是保留雜質(zhì)，待測(cè)組分不被保留而自然流出或者被洗脫。更為常用的一種途徑是先使待測(cè)物*保留在柱上，使干擾雜質(zhì)隨樣品溶劑或洗滌。

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