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液相色譜技術(shù)的廣泛應(yīng)用也得力于近年來(lái)各種色譜填料技術(shù)的發(fā)展為色譜分離提供了越來(lái)越多樣的選擇性。近年來(lái)人們制備了大量的含有不同鍵合基團(tuán)的色譜填料以增強(qiáng)色譜柱的選擇性，從而滿足實(shí)際樣品分離的需要，例如親水作用色譜(HILIC)填料、立體保護(hù)鍵合色譜填料、極性嵌入反相色譜填料、有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化色譜 填料、親水性體積排阻色譜填料、混合模式色譜填料、手性色譜填料以及聚合物基質(zhì)色譜柱填料等。近年來(lái)，液相色譜填料技術(shù)具有越來(lái)越豐富的選擇性。
1、HILIC色譜填料。它采用極性固定相和含有一定水的水溶性有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，不僅克服了正相色譜和反相色譜對(duì)極性化合物分離的不足，而且提供了與反相色譜截然不同選擇性，在強(qiáng) 極性和離子型化合物如氨基酸、碳水化合物和多肽等的分離中發(fā)揮著重要作用。并且，由于其流動(dòng)相含有高濃度的有機(jī)溶劑，有利于增強(qiáng)電噴霧離子源質(zhì)譜的離子化 效率，進(jìn)而提高其靈敏度，與質(zhì)譜具有很好的兼容性。過去5-6年HILIC模式色譜柱的應(yīng)用增長(zhǎng)非?？?。目前商品化的HILIC色譜填料種類繁多，基于硅膠基質(zhì)的HILIC填料包括裸硅膠、氨基、氰基、二醇基、酰胺型以及兩性離子型等。
2、極性嵌入反相色譜填料。它通過在硅膠鍵合烷基鏈的中下部鑲嵌一些極性基團(tuán)，如烷基胺、酰胺、季銨或者氨基甲酸酯等極性基團(tuán)來(lái)降低未反應(yīng)硅醇基活性和改善對(duì)極性化合物的保留能力。這種填料具有的大優(yōu)勢(shì)是減少了填料表面游離硅羥基與堿性化合物間的“次級(jí)保留”作用，從而改善堿性化合物峰型的拖尾，而且由于極性基團(tuán)的嵌入，增強(qiáng)了對(duì)極性化合物的保留，提供和普通C18很不一樣的選擇性。
3、立體保護(hù)鍵合相。它是在硅膠的烷基鏈側(cè)鏈鍵合含異丙基和異丁基的C18固定相。由于在C18烷基鏈上引入了較大的基團(tuán)以及立體效應(yīng)，阻礙了硅醇基與分析物的相互作用，因而對(duì) 堿性化合物的分離呈現(xiàn)出對(duì)稱的峰型并具有良好的柱效，防止堿性化合物在色譜柱上的拖尾，并且在低pH值時(shí)有較高的水解穩(wěn)定性。
4、有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化色譜填料。它是在超高純?nèi)嗫坠枘z微球基質(zhì) 表面涂覆一層厚度均勻的有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化層，進(jìn)而提高填料的pH耐受范圍和應(yīng)用能力的一種填料。這種類型的填料能夠耐受pH 值很高的流動(dòng)相，并且具有很好的pH值穩(wěn)定性，它的pH耐受范圍可以達(dá)到1.5-12，而常規(guī)的硅膠基質(zhì)色譜填料pH值范圍一般僅為2-8;它能夠耐受各 種緩沖液體系，柱壽命長(zhǎng)。
5、親水性體積排阻(SEC)色譜填料。它 是在超高純?nèi)嗫坠枘z表面包覆一層具有良好穩(wěn)定性的親水性聚合物的體積排阻色譜填料，其填料的作用基團(tuán)為二醇基。其填料表面 因受二醇基官能團(tuán)保護(hù)而不與蛋白質(zhì)相互作用。使得蛋白、生物酶、多肽等樣品的非特異性吸附極小;因而廣泛應(yīng)用于生物大分子的分離。
6、混合模式色譜填料。它是在一根色譜柱上實(shí)現(xiàn)兩種或多種分離機(jī)理共同主導(dǎo)的色譜柱填料?；旌夏Ｊ缴V分離的基礎(chǔ)是色譜固定相能同時(shí)提供多種作用力，如鍵合相同時(shí)包含烷基鏈和電荷 中心，則可以提供疏水作用力和靜電作用力，實(shí)現(xiàn)反相和離子交換混合模式色譜分離。由于多種作用力的存在，混合模式色譜可以顯著地提高分離選擇性，這樣就可 以實(shí)現(xiàn)根據(jù)樣品的不同特性進(jìn)行分離。
7、手性色譜填料。它是由具有光學(xué)活性的單體，固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相。通過引入手性環(huán)境 使對(duì)映異構(gòu)體間呈現(xiàn)物理特征的差異，從而達(dá)到光學(xué)異構(gòu)體拆分的目的。一個(gè)有效的手性填料應(yīng)當(dāng)具有能夠快速分離對(duì)映體，測(cè)定對(duì)映體的純度，盡可能適應(yīng)多種類 型的對(duì)映體的分離;應(yīng)當(dāng)具有較高的對(duì)映體分離選擇性和柱容量。目前，手性填料主要有以下5大類: (1)多糖類手性色譜填料：主要包括纖維素和淀粉兩大類手性固定相;(2)大環(huán)手性色譜填料：主要是用大環(huán)分子和環(huán)糊精、手性冠醚來(lái)形成的固定相;(3) 糖肽類手性固定相：主要是用萬(wàn)古霉素、利福霉素B等制成的手性固定相;(4)多肽或蛋白質(zhì)手性固定相;(5)配體交換手性固定相:建立在金屬配合物的配體 交換的基礎(chǔ)之上的固定相。
8、后，有機(jī)高分子基質(zhì)液相色譜填料也是一個(gè)非常活躍的領(lǐng)域，主要分為多糖型基質(zhì)填料和聚合物型基質(zhì)填料。同 硅膠基質(zhì)的填料相比，此類填料具備高負(fù)載量、 高化學(xué)穩(wěn)定性(耐酸 、耐堿、耐溶劑處理)，對(duì)于生物大分子不易產(chǎn)生不可逆的非特性吸附作用等優(yōu)點(diǎn)。這些優(yōu)點(diǎn)決定了其廣泛的應(yīng)用前景，特別是生物大分子的分離和分析。一般來(lái) 說(shuō)，有機(jī)高分子基質(zhì)色譜填料的柱效低于硅膠基質(zhì)的填料。
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