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乙酰膽堿酯酶(AChE)活性發(fā)光檢測方法

來源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2018年08月17日 09:32  

    乙酰膽堿(acetylcholine,ACh)是一種神經(jīng)遞質(zhì),能特異性的作用于各類膽堿受體。乙酰膽堿參與神經(jīng)遞質(zhì)過程,在下一次神經(jīng)沖動開始前乙酰膽堿會被AChE 降解掉。AChE 會被神經(jīng)內(nèi)毒素和殺蟲劑所抑制,由于神經(jīng)內(nèi)毒素和殺蟲劑對人和動物的嚴(yán)重毒副作用而成為很多科學(xué)家所關(guān)注的一個領(lǐng)域。另外,在一些疾病治療過程中,例如在Alzheimer's 疾病中,研究人員也對AChE 抑制劑可能產(chǎn)生的功能進(jìn)行了研究。


    AChE 活性檢測試劑盒使用乙酰膽堿經(jīng)過一系列酶促反應(yīng),在發(fā)光反應(yīng)中快速地將反應(yīng)中活性AChE 的量以光信號形式輸出。樣品中的AChE 抑制劑的存在使得樣品中ATP 水平升高,這可以通過發(fā)光來定量。


    檢測方法:
    以aCella – AchE檢測試劑盒為例
    1. 試劑準(zhǔn)備
    將A、B、C三個溶液分別避光溶解,并且平衡到室溫。
    2. 樣品準(zhǔn)備
    對照1:加入溶液50ulC,不包含AChE,代表100%抑制
    對照2:加入溶液50ulA,不加入樣品或抑制劑,代表無抑制
    樣品:加入10-50ul樣品或抑制劑,重復(fù)設(shè)置三個復(fù)孔
    對以上所有待測液加入50ul溶液B
    3. 檢測結(jié)果
    次檢測時,可以對單個樣品多次檢測發(fā)光,每次間隔30秒,以確定反應(yīng)的穩(wěn)定時間。
    然后所有樣品在這個時間點(diǎn)上檢測發(fā)光值。

 

    參考文獻(xiàn):
    Schallreuter KU et al. Activation/deactivation of acetylcholinesterase by H2O2: more evidence for oxidative stress in vitiligo. Biochem Biophys Res Commun. 2004 Mar 5;315(2):502-8.
    Bolognesi ML et al. Propidium-based polyamine ligands as potent inhibitors of acetylcholinesterase and acetylcholinesterase-induced amyloid-beta aggregation. J Med Chem. 2005 Jan 13;48(1):24-7.

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