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光學(xué)顯微鏡分類

來源:重慶萊奧儀器有限公司   2018年12月17日 11:03  

顯微鏡是由一個(gè)透鏡或幾個(gè)透鏡的組合構(gòu)成的一種光學(xué)儀器,是人類進(jìn)入原子時(shí)代的標(biāo)志。主要用于放大微小物體成為人的肉眼所能看到的儀器。顯微鏡分光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡:光學(xué)顯微鏡是在1590年由荷蘭的楊森父子所創(chuàng)?,F(xiàn)在的光學(xué)顯微鏡可把物體放大1600倍,分辨的小極限達(dá)0.1微米,國(guó)內(nèi)顯微鏡機(jī)械筒長(zhǎng)度一般是160mm。電子顯微鏡是在1926年,被漢斯·*發(fā)明出來的。

顯微鏡

中文名稱顯微鏡,英文名稱microscope。

Motic生物顯微鏡

顯微鏡是人類這個(gè)時(shí)期偉大的發(fā)明物之一。在它發(fā)明出來之前,人類關(guān)于周圍世界的觀念局限在用肉眼,或者靠手持透鏡幫助肉眼所看到的東西。

顯微鏡把一個(gè)全新的世界展現(xiàn)在人類的視野里。人們次看到了數(shù)以百計(jì)的“新的”微小動(dòng)物和植物,以及從人體到植物纖維等各種東西的內(nèi)部構(gòu)造。顯微鏡還有助于科學(xué)家發(fā)現(xiàn)新物種,有助于醫(yī)生治療疾病。

早的顯微鏡是16世紀(jì)末期在荷蘭制造出來的。是亞斯·詹森,荷蘭眼鏡商,或者另一位荷蘭科學(xué)家漢斯·利珀希,他們用兩片透鏡制作了簡(jiǎn)易的顯微鏡,但并沒有用這些儀器做過任何重要的觀察。

后來有兩個(gè)人開始在科學(xué)上使用顯微鏡。個(gè)是意大利科學(xué)家伽利略。他通過顯微鏡觀察到一種昆蟲后,次對(duì)它的復(fù)眼進(jìn)行了描述。第二個(gè)是荷蘭亞麻織品商人安東尼·凡·列文虎克(1632年-1723年),他自己學(xué)會(huì)了磨制透鏡。他次描述了許多肉眼所看不見的微小植物和動(dòng)物。

1931年,恩斯特·魯斯卡通過研制電子顯微鏡,使生物學(xué)發(fā)生了一場(chǎng)革命。這使得科學(xué)家能觀察到像百萬分之一毫米那樣小的物體。1986年他被授予諾貝爾獎(jiǎng)。

光學(xué)顯微鏡由目鏡,物鏡,粗準(zhǔn)焦螺旋,細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,壓片夾,通光孔,遮光器,轉(zhuǎn)換器,反光鏡,載物臺(tái),鏡臂,鏡筒,鏡座,聚光器,光闌組成。

顯微鏡以顯微原理進(jìn)行分類可分為光學(xué)顯微鏡與電子顯微鏡。

光學(xué)顯微鏡通常皆由光學(xué)部分、照明部分和機(jī)械部分組成。無疑光學(xué)部分是為關(guān)鍵的,它由目鏡和物鏡組成。早于1590年,荷蘭和意大利的眼鏡制造者已經(jīng)造出類似顯微鏡的放大儀器。光學(xué)顯微鏡的種類很多,主要有明視野顯微鏡(普通光學(xué)顯微鏡)、暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡、相差顯微鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡、偏光顯微鏡、微分干涉差顯微鏡、倒置顯微鏡。

電子顯微鏡有與光學(xué)顯微鏡相似的基本結(jié)構(gòu)特征,但它有著比光學(xué)顯微鏡高得多的對(duì)物體的放大及分辨本領(lǐng),它將電子流作為一種新的光源,使物體成像。自1938年Ruska發(fā)明臺(tái)透射電子顯微鏡至今,除了透射電鏡本身的性能不斷的提高外,還發(fā)展了其他多種類型的電鏡。如掃描電鏡、分析電鏡、超高壓電鏡等。結(jié)合各種電鏡樣品制備技術(shù),可對(duì)樣品進(jìn)行多方面的結(jié)構(gòu) 或結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的深入研究。顯微鏡被用來觀察微小物體的圖像。常用于生物、醫(yī)藥及微小粒子的觀測(cè)。電子顯微鏡可把物體放大到200萬倍。

臺(tái)式顯微鏡,主要是指?jìng)鹘y(tǒng)式的顯微鏡,是純光學(xué)放大,其放大倍率較高,成像質(zhì)量較好,但一般體積較大,不便于移動(dòng),多應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi),不便外出或現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

便攜式顯微鏡,主要是近幾年發(fā)展出來的數(shù)碼顯微鏡與視頻顯微鏡系列的延伸。和傳統(tǒng)光學(xué)放大不同,手持式顯微鏡都是數(shù)碼放大,其一般追求便攜,小巧而精致,便于攜帶;且有的手持式顯微鏡有自己的屏幕,可脫離電腦主機(jī)獨(dú)立成像,操作方便,還可集成一些數(shù)碼功能,如支持拍照,錄像,或圖像對(duì)比,測(cè)量等功能。

數(shù)碼液晶顯微鏡,早是由上海光密儀器公司研發(fā)生產(chǎn)的,該顯微鏡保留了光學(xué)顯微鏡的清晰,匯集了數(shù)碼顯微鏡的強(qiáng)大拓展、視頻顯微鏡的直觀顯示和便攜式顯微鏡的簡(jiǎn)潔方便等優(yōu)點(diǎn)。

早在公元前一世紀(jì),人們就已發(fā)現(xiàn)通過球形透明物體去觀察微小物體時(shí),可以使其放大成像。后來逐漸對(duì)球形玻璃表面能使物體放大成像的規(guī)律有了認(rèn)識(shí)。

1590年,荷蘭Z·Jansen(詹森)和意大利人的眼鏡制造者已經(jīng)造出類似顯微鏡的放大儀器。

1611年,Kepler(克卜勒):提議復(fù)合式顯微鏡的制作方式。

1665年,R·Hooke(羅伯特·虎克):「細(xì)胞」名詞的由來便由胡克利用復(fù)合式顯微鏡觀察軟木的木栓組織上的微小氣孔而得來的。

1674年,A·V·Leeuwenhoek(列文虎克):發(fā)現(xiàn)原生動(dòng)物學(xué)的報(bào)導(dǎo)問世,并于九年后成為*發(fā)現(xiàn)「細(xì)菌」存在的人。

1833年,Brown(布朗):在顯微鏡下觀察紫羅蘭,隨后發(fā)表他對(duì)細(xì)胞核的詳細(xì)論述。

1838年,Schlieden and Schwann(施萊登和施旺):皆提倡細(xì)胞學(xué)原理,其主旨即為「有核細(xì)胞是所有動(dòng)植物的組織及功能之基本元素」。

1857年,Kolliker(寇利克):發(fā)現(xiàn)肌肉細(xì)胞中之線粒體。

1876年,Abbe(阿比):剖析影像在顯微鏡中成像時(shí)所產(chǎn)生的繞射作用,試圖設(shè)計(jì)出理想的顯微鏡。

1879年,F(xiàn)lrmming(佛萊明):發(fā)現(xiàn)了當(dāng)動(dòng)物細(xì)胞在進(jìn)行有絲分裂時(shí),其染色體的活動(dòng)是清晰可見的。

1881年,Retziue(芮祖):動(dòng)物組織報(bào)告問世,此項(xiàng)發(fā)表在當(dāng)世尚無人能*逾越。然而在20年后,卻有以Cajal(卡嘉爾)為首的一群組織學(xué)家發(fā)展出顯微鏡染色觀察法,此舉為日后的顯微解剖學(xué)立下了基礎(chǔ)。

1882年,Koch(寇克):利用苯安染料將微生物組織進(jìn)行染色,由此他發(fā)現(xiàn)了霍亂及結(jié)核桿菌。往后20年間,其它的細(xì)菌學(xué)家,像是Klebs 和 Pasteur(克萊柏和帕斯特)則是藉由顯微鏡下檢視染色藥品而證實(shí)許多疾病的病因。

1886年,Zeiss(蔡司):打破一般可見光理論上的極限,他的發(fā)明--阿比式及其它一系列的鏡頭為顯微學(xué)者另辟一新的解像天地。

1898年,Golgi(高爾基):*發(fā)現(xiàn)細(xì)菌中高爾基體的顯微學(xué)家。他將細(xì)胞用硝酸銀染色而成就了人類細(xì)胞研究上的一大步。

1924年,Lacassagne(蘭卡辛):與其實(shí)驗(yàn)工作伙伴共同發(fā)展出放射線照相法,這項(xiàng)發(fā)明便是利用放射性釙元素來探查生物標(biāo)本。

1930年,Lebedeff(萊比戴衛(wèi)):設(shè)計(jì)并搭配架干涉顯微鏡。另外由Zernicke(卓尼柯)在1932年發(fā)明出相位差顯微鏡,兩人將傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡延伸發(fā)展出來的相位差觀察使生物學(xué)家得以觀察染色活細(xì)胞上的種種細(xì)節(jié)。

1941年,Coons(昆氏):將抗體加上螢光染劑用以偵測(cè)細(xì)胞抗原。

1952年,Nomarski(諾馬斯基):發(fā)明干涉相位差光學(xué)系統(tǒng)。此項(xiàng)發(fā)明不僅享有專li權(quán)并以本人命名之。

1981年,Allen and Inoue(艾倫及艾紐):將光學(xué)顯微原理上的影像增強(qiáng)對(duì)比,發(fā)展趨于境界。

1988年,Confocal(共軛焦)掃描顯微鏡在市場(chǎng)上被廣為使用。

 

顯微鏡分為 光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡。

 

簡(jiǎn)介

它是在1590年由荷蘭的詹森父子所創(chuàng)。光學(xué)顯微鏡可把物體放大1600倍,分辨的小極限達(dá)0.1微米。光學(xué)顯微鏡的種類很多,除一般的外,主要有暗視野顯微鏡一種具有暗視野聚光鏡,從而使照明的光束不從中央部分射入,而從四周射向標(biāo)本的顯微鏡.熒光顯微鏡以紫外線為光源,使被照射的物體發(fā)出熒光的顯微鏡。結(jié)構(gòu)為:目鏡,鏡筒,轉(zhuǎn)換器,物鏡,載物臺(tái),通光孔,遮光器,壓片夾,反光鏡,鏡座,粗準(zhǔn)焦螺旋,細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,鏡臂,鏡柱。

暗視野顯微鏡

暗視野顯微鏡由于不將透明光射入直接觀察系統(tǒng),無物體時(shí),視野暗黑,不可能觀察到任何物體,當(dāng)有物體時(shí),以物體衍射回的光與散射光等在暗的背景中明亮可見。在暗視野觀察物體,照明光大部分被折回,由于物體(標(biāo)本)所在的位置結(jié)構(gòu),厚度不同,光的散射性,折光等都有很大的變化。

相位差顯微鏡

相位差顯微鏡的結(jié)構(gòu): 相位差顯微鏡,是應(yīng)用相位差法的顯微鏡。因此,比通常的顯微鏡要增加下列附件:

(1) 裝有相位板(相位環(huán)形板)的物鏡,相位差物鏡。

(2) 附有相位環(huán)(環(huán)形縫板)的聚光鏡,相位差聚光鏡。

(3) 單色濾光鏡-(綠)。

各種元件的性能說明

(1) 相位板使直接光的相位移動(dòng) 90°,并且吸收減弱光的強(qiáng)度,在物鏡后焦平面的適當(dāng)位置裝置相位板,相位板必須確保亮度,為使衍射光的影響少一些,相位板做成環(huán)形狀。

(2) 相位環(huán)(環(huán)狀光圈)是根據(jù)每種物鏡的倍率,而有大小不同,可用轉(zhuǎn)盤器更換。

(3) 單色濾光鏡系用中心波長(zhǎng)546nm(毫微米)的綠色濾光鏡。通常是用單色濾光鏡入觀察。相位板用特定的波長(zhǎng),移動(dòng)90°看直接光的相位。當(dāng)需要特定波長(zhǎng)時(shí),必須選擇適當(dāng)?shù)臑V光鏡,濾光鏡插入后對(duì)比度就提高。此外,相位環(huán)形縫的中心,必須調(diào)整到正確方位后方能操作,對(duì)中望遠(yuǎn)鏡

相位差顯微鏡的整體外形

就是起這個(gè)作用部件。

視頻顯微鏡

將傳統(tǒng)的顯微鏡與攝象系統(tǒng),顯示器或者電腦相結(jié)合,達(dá)到對(duì)被測(cè)物體的放大觀察的目的。

視頻顯微鏡

早的雛形應(yīng)該是相機(jī)型顯微鏡,將顯微鏡下得到的圖像通過小孔成象的原理,投影到感光照片上,從而得到圖片。或者直接將照相機(jī)與顯微鏡對(duì)接,拍攝圖片。隨著CCD攝像機(jī)的興起,顯微鏡可以通過其將實(shí)時(shí)圖像轉(zhuǎn)移到電視機(jī)或者監(jiān)視器上,直接觀察,同時(shí)也可以通過相機(jī)拍攝。80年代中期,隨著數(shù)碼產(chǎn)業(yè)以及電腦業(yè)的發(fā)展,顯微鏡的功能也通過它們得到提升,使其向著更簡(jiǎn)便更容易操作的方面發(fā)展。到了90年代末,半導(dǎo)體行業(yè)的發(fā)展,晶圓要求顯微鏡可以帶來更加配合的功能,硬件與軟件的結(jié)合,智能化,人性化,使顯微鏡在工業(yè)上有了更大的發(fā)展。

熒光顯微鏡

在螢光顯微鏡上,必須在標(biāo)本的照明光中,選擇出特定波長(zhǎng)的激發(fā)光,以產(chǎn)生熒光,然后必須在激發(fā)光和熒光混合的光線中,單把熒光分離出來以供觀察。因此,在選擇特定波長(zhǎng)中,濾光鏡系統(tǒng),成為極其重要的角色。

 

熒光顯微鏡原理:

(A) 光源:光源輻射出各種波長(zhǎng)的光(以紫外至紅外)。

(B) 激勵(lì)濾光源:透過能使標(biāo)本產(chǎn)生螢光的特定波長(zhǎng)的光,同時(shí)阻擋對(duì)激發(fā)螢光無用的光。

(C) 熒光標(biāo)本:一般用熒光色素染色。

(D) 阻擋濾光鏡:阻擋掉沒有被標(biāo)本吸收的激發(fā)光有選擇地透射熒光,在熒光中也有部分波長(zhǎng)被選擇透過。  以紫外線為光源,使被照射的物體發(fā)出熒光的顯微鏡。電子顯微鏡是在1931年在德國(guó)柏林由克諾爾和哈羅斯卡首先裝配完成的。這種顯微鏡用高速電子束代替光束。由于電子流的波長(zhǎng)比光波短得多,所以電子顯微鏡的放大倍數(shù)可達(dá)80萬倍,分辨的小極限達(dá)0.2納米。1963年開始使用的掃描電子顯微鏡更可使人看到物體表面的微小結(jié)構(gòu)。

顯微鏡被用來放大微小物體的圖像。一般應(yīng)用于對(duì)生物、醫(yī)藥、微觀粒子等觀測(cè)。

(1)利用微微動(dòng)載物臺(tái)之移動(dòng),配全目鏡之十字座標(biāo)線,作長(zhǎng)度量測(cè)。

(2)利用旋轉(zhuǎn)載物臺(tái)與目鏡下端之游標(biāo)微分角度盤,配全合目鏡之址字座標(biāo)線,作角度量測(cè),令待測(cè)角一端對(duì)準(zhǔn)十字線與之重合,然后再讓另一端也重合。

(3)利用標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)螺紋的節(jié)距、節(jié)徑、外徑、牙角及牙形等尺寸或外形。

(4)檢驗(yàn)金相表面的晶粒狀況。

(5)檢驗(yàn)工件加工表面的情況。

(6)檢測(cè)微小工件的尺寸或輪廓是否與標(biāo)準(zhǔn)片相符。

偏光顯微鏡

偏光顯微鏡是用于研究所謂透明與不透明各向異性材料的一種顯微鏡。凡具有雙折射的物質(zhì),在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚,當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色法來進(jìn)行觀察,但有些則不可能,而必須利用偏光顯微鏡。

偏振光顯微鏡

(1)偏光顯微鏡的特點(diǎn)

將普通光改變?yōu)槠窆膺M(jìn)行鏡檢的方法,以鑒別某一物質(zhì)是單折射(各向同行)或雙折射性(各向異性)。雙折射性是晶體的基本特性。因此,偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物、化學(xué)等領(lǐng)域,在生物學(xué)和植物學(xué)也有應(yīng)用。

(2)偏光顯微鏡的基本原理

偏光顯微鏡的原理比較復(fù)雜,在此不作過多介紹,偏光顯微鏡必須具備以下附件:起偏鏡,檢偏鏡,補(bǔ)償器或相位片,無應(yīng)力物鏡,旋轉(zhuǎn)載物臺(tái)。

 

超聲波顯微鏡

 

超聲波掃描顯微鏡的特點(diǎn)在于能夠的反映出聲波和微小樣品的彈性介質(zhì)之間的相互作用,并對(duì)從樣品內(nèi)部反饋回來的信號(hào)進(jìn)行分析!圖像上(C-Scan)的每一個(gè)象素對(duì)應(yīng)著從樣品內(nèi)某一特定深度的一個(gè)二維空間坐標(biāo)點(diǎn)上的信號(hào)反饋,具有良好聚焦功能的Z.A傳感器同時(shí)能夠發(fā)射和接收聲波信號(hào)。一副完整的圖像就是這樣逐點(diǎn)逐行對(duì)樣品掃描而成的。反射回來的超聲波被附加了一個(gè)正的或負(fù)的振幅,這樣就可以用信號(hào)傳輸?shù)臅r(shí)間反映樣品的深度。用戶屏幕上的數(shù)字波形展示出接收到的反饋信息(A-Scan)。設(shè)置相應(yīng)的門電路,用這種定量的時(shí)間差測(cè)量(反饋時(shí)間顯示),就可以選擇您所要觀察的樣品深度。

解剖顯微鏡

解剖鏡(立體顯微鏡、體視顯微鏡)(11張)

解剖顯微鏡,又被稱為實(shí)體顯微鏡、體視顯微鏡或立體顯微鏡,是為了不同的工作需求所設(shè)計(jì)的顯微鏡。利用解剖顯微鏡觀察時(shí),進(jìn)入兩眼的光各來自一個(gè)獨(dú)立的路徑,這兩個(gè)路徑只夾一個(gè)小小的角度,因此在觀察時(shí),樣品可以呈現(xiàn)立體的樣貌。解剖顯微鏡的光路設(shè)計(jì)有兩種: The Greenough Concept和The Telescope Concept。解剖顯微鏡常常用在一些固體樣本的表面觀察,或是解剖、鐘表制作和小電路板檢查等工作上。

共聚焦顯微鏡

從一個(gè)點(diǎn)光源發(fā)射的探測(cè)光通過透鏡聚焦到被觀測(cè)物體上,如果物體恰在焦點(diǎn)上,那么反射光通過原透鏡應(yīng)當(dāng)匯聚回到光源,這就是所謂的共聚焦,簡(jiǎn)稱共焦。激光掃描共聚焦顯微鏡[Confocal Laser Scanning Microscope(CLSM或LSCM)]在反射光的光路上加上了一塊半反半透鏡(dichroic mirror),將已經(jīng)通過透鏡的反射光折向其它方向,在其焦點(diǎn)上有一個(gè)帶有針孔(Pinhole),小孔就位于焦點(diǎn)處,擋板后面是一個(gè) 光電倍增管(photomultiplier tube,PMT)??梢韵胂?,探測(cè)光焦點(diǎn)前后的反射光通過這一套共焦系統(tǒng),必不能聚焦到小孔上,會(huì)被擋板擋住。于是光度計(jì)測(cè)量的就是焦點(diǎn)處的反射光強(qiáng)度。其意義是:通過移動(dòng)透鏡系統(tǒng)可以對(duì)一個(gè)半透明的物體進(jìn)行三維掃描

金相顯微鏡

金相顯微鏡主要用于鑒定和分析金屬內(nèi)部結(jié)構(gòu)組織,它是金屬學(xué)研究金相的重要儀器,是工業(yè)部門鑒定產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵設(shè)備,該儀器配用攝像裝置,可攝取金相圖譜,并對(duì)圖譜進(jìn)行測(cè)量分析,對(duì)圖象進(jìn)行編輯、輸出、存儲(chǔ)、管理等功能。 國(guó)內(nèi)廠家較多,歷史悠久。

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