氧化應(yīng)激（Oxidative Stress）是指體內(nèi)氧化與抗氧化作用失衡，傾向于氧化，導致中性粒細胞炎性浸潤，蛋白酶分泌增加，產(chǎn)生大量氧化中間產(chǎn)物。氧化應(yīng)激是由自由基在體內(nèi)產(chǎn)生的一種負面作用，并被認為是導致衰老和疾病的一個重要因素。

細胞和組織內(nèi)蛋白巰基的氧化狀態(tài)可指示氧化應(yīng)激。然而，組織樣品中蛋白巰基氧化狀態(tài)的定量檢測還面臨一些技術(shù)障礙，譬如如何制備樣品而不影響其氧化狀態(tài)，以及如何檢測相對微小的變化。

zui近，澳大利亞西澳大學的研究人員開發(fā)出一種新的熒光技術(shù)，能克服上述問題，準確測定蛋白巰基的氧化狀態(tài)。他們通過熒光酶標儀可靠地測定蛋白巰基氧化狀態(tài)的整體微小變化，隨后通過SDS-PAGE檢測特定蛋白的氧化狀態(tài)。

他們開發(fā)出的這種新技術(shù)能改善蛋白溶解，并避免樣品中蛋白被認為氧化。在溶解步驟，還原型巰基被標上綠色熒光的BODIPY FL馬來酰亞胺。在去除了過量的BODIPY FL馬來酰亞胺之后，剩余的氧化型蛋白巰基被TCEP還原。隨后這種新生成的還原型氧化巰基與紅色熒光的Texas Red® 馬來酰亞胺相互作用，并去除多余的染料。

由于BODIPY® FL and Texas Red® 熒光基團顯示出極少的熒光發(fā)射重疊，因此，利用這兩種熒光染料標記蛋白能夠?qū)崿F(xiàn)同一個樣品中氧化性和還原型蛋白巰基的定量測定，所需的儀器只是一臺熒光酶標儀。通過測定氧化型和還原型蛋白巰基，研究人員能夠檢測到生物樣品的微小差異。

此外，這種雙標記技術(shù)還能檢測特定蛋白的巰基氧化狀態(tài)。通過SDS-PAGE和熒光凝膠掃描儀，就能了解特定蛋白巰基的氧化狀態(tài)。