基于“病證結(jié)合”理論探討廣泛性焦慮心陰
虧虛證大鼠模型的構(gòu)建與評價(jià)

摘要：目的：基于“病證結(jié)合”理論，構(gòu)建和評價(jià)廣泛性焦慮（generalized anxiety disorder, GAD)心陰虧虛證 大鼠模型。方法:按隨機(jī)數(shù)字表法將32只SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組8只，即空白組、模型組、天王補(bǔ)心丸組、di西泮片組。根據(jù)先疾病后證型的思路進(jìn)行造模，除空白組外，其余3組大鼠通過不確定性空瓶應(yīng)激法先建立 GAD模型，再采用水環(huán)境小站臺(tái)睡眠剝奪法形成大鼠心陰虧虛證候模型，以此構(gòu)建GAD心陰虧虛證模型。造模 成功后，空白組和模型組不給與任何處理，天王補(bǔ)心丸組、di西泮片組分別給予天王補(bǔ)心丸、di西泮片灌胃，1次/ d,連續(xù)干預(yù)21 d。從宏觀表征、微觀指標(biāo)、以方驗(yàn)證三個(gè)方面對模型進(jìn)行評價(jià)。每日觀察大鼠一般情況。造模 前、造模后及干預(yù)第1、2、3周末采用高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、曠場實(shí)驗(yàn)觀察大鼠行為學(xué)變化。造模前、造模后及干預(yù) 第3周末檢測大鼠收縮壓、心率、呼吸、肛溫水平。干預(yù)第3周末采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（real - time PCR)檢測大鼠海馬GR mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：（1)宏觀表征：①行為學(xué)結(jié)果顯示：與空白組比較，造模后、 造模后1周、造模后2周、造模后3周模型組OE%值、OT%值、水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)均降低（P <0. 05)。②生命體 征結(jié)果顯示：與空白組比較，造模后、造模后3周模型組收縮壓均較低（P<0. 01);心率、呼吸、肛溫均較高（P< 0.01)。（2)微觀指標(biāo):RT-PCR結(jié)果顯示：造模后3周，與空白組比較，模型組大鼠海馬GR mRNA表達(dá)水平降 低（P <0. 01)。（3)以方驗(yàn)證：①行為學(xué)結(jié)果：與模型組比較，天王補(bǔ)心丸組、di西泮片組干預(yù)后各時(shí)間點(diǎn)OE%值、OT%值、水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)均升高（P<0. 05);di西泮片組干預(yù)后各時(shí)間點(diǎn)OE%值、干預(yù)第1、周末OT%值、水平運(yùn)動(dòng)和干預(yù)第1、周末垂直運(yùn)動(dòng)均升高（P <0. 01)。②生命體征結(jié)果：干預(yù)第3周末，與模型組比較，天 王補(bǔ)心丸組、di西泮片組收縮壓均升高（P <0. 05),心率、呼吸、肛溫均降低（P <0. 05)。③RT - PCR結(jié)果：干預(yù) 第3周末，與模型組比較，天王補(bǔ)心丸組、di西泮片組大鼠海馬GR mRNA表達(dá)水平均升高（P <0. 05)。結(jié)論：采 用不確定性空瓶應(yīng)激法結(jié)合水環(huán)境小站臺(tái)睡眠剝奪法成功構(gòu)建了 GAD心陰虧虛病證結(jié)合模型，該模型較為穩(wěn) 定，可控性相對較強(qiáng)，值得進(jìn)一步應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：廣泛性焦慮;心陰虧虛;病證結(jié)合;模型

廣泛性焦慮癥（GAD)是常見的焦慮癥類型，以泛化 或持續(xù)存在的焦慮為主要臨床表現(xiàn)，常伴有自主神經(jīng)功能 紊亂及運(yùn)動(dòng)不安的癥狀¹。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為心脾兩虛、肝郁化 火和心腎不交是GAD的主要證型²。隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏 的加快，工作生活壓力的加大，GAD證型逐步由肝郁化火 向心陰虧虛轉(zhuǎn)變³。近年來，眾多學(xué)者^4-6聚焦于中醫(yī)藥 治療GAD的多靶點(diǎn)整體作用優(yōu)勢，相繼報(bào)道了中藥、針灸、 推拿等對GAD的治療效果。但是，關(guān)于中醫(yī)藥治療GAD 的具體作用機(jī)制仍不清楚⁷。中醫(yī)診療講究對疾病進(jìn)行 辨證論治，但目前關(guān)于GAD的病證結(jié)合動(dòng)物模型還不夠成 熟，由于缺乏機(jī)制研究的載體，所以影響了 GAD的中醫(yī)應(yīng) 用基礎(chǔ)研究進(jìn)一步開展⁸。因此，建立穩(wěn)定的、可重復(fù)的、 符合中醫(yī)病因bin機(jī)的GAD病證結(jié)合動(dòng)物模型十分必要。 病證結(jié)合既是一種理論，也是一種方法，體現(xiàn)了現(xiàn)代中醫(yī) “據(jù)病言證，究證言法，法隨證立，方證相應(yīng)”的診療思 路⁹。病證結(jié)合動(dòng)物模型^[10 ,是基于中醫(yī)藥理論指導(dǎo)，結(jié) 合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)知識(shí)，采用中醫(yī)學(xué)病因復(fù) 制證候動(dòng)物模型，通過現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病因復(fù)制疾病動(dòng)物模型，令 模型同時(shí)具有疾病與證候特征的一類造模方法。本研究根 據(jù)病證結(jié)合理論，采用不確定性空瓶應(yīng)激法^[11]建立GAD 疾病模型，結(jié)合水環(huán)境小站臺(tái)睡眠剝奪法^[12造成心陰虧虛 證候模型，終構(gòu)建了 GAD心陰虧虛病證結(jié)合模型，并從 宏觀表征、微觀指標(biāo)、以方驗(yàn)證（天王補(bǔ)心丸）三個(gè)角度評 價(jià)了該模型

結(jié)果顯示：①行為學(xué)：與模型組比較，天王補(bǔ)心丸組、di西泮片組干預(yù)后各時(shí)間點(diǎn)OE%值、OT%值、水平運(yùn)動(dòng)、垂 直運(yùn)動(dòng)均升高（P< 〇.〇5);di西泮片組干預(yù)后各時(shí)間點(diǎn) OE%值、干預(yù)第1、周末OT%值、各時(shí)間點(diǎn)水平運(yùn)動(dòng)和干 預(yù)第1、周末垂直運(yùn)動(dòng)均升高（P<0. 01)。②生命體征： 干預(yù)第3周末，與模型組比較，天王補(bǔ)心丸組、di西泮片組 收縮壓均升高（P < 0. 05),心率、呼吸、肛溫均降低（P < 0. 05)。③RT - PCR:干預(yù)第3周末，與模型組比較，天王補(bǔ) 心丸組、di西泮片組大鼠海馬GR mRNA表達(dá)水平均升高 (P <0.05)。結(jié)果說明天王補(bǔ)心丸明顯改善了模型中GAD 心陰虧虛大鼠的焦慮癥狀及心陰虧虛狀況。中醫(yī)學(xué)有‘‘方 證相應(yīng)”之說，方證相應(yīng)強(qiáng)調(diào)了方劑與其作用對象之間的 相互作用，即方劑的功用是特定方藥與其作用對象特定證 之間相互作用的結(jié)果²⁶ ,故通過‘‘以方驗(yàn)證”的方式可以 反證證候模型是否構(gòu)建成功。天王補(bǔ)心丸為中醫(yī)經(jīng)典名 方，具有滋陰養(yǎng)血、補(bǔ)心安神等功效，主要用于心陰不足，心 悸健忘，失眠多夢等癥,是治療GAD心陰虧虛證的代表性 方藥^27-28。已有臨床研究²⁹證實(shí)，采用天王補(bǔ)心湯治療 心陰不足型GAD可以達(dá)到和西藥同樣的抗焦慮效果。本 研究結(jié)果表明天王補(bǔ)心丸對GAD心陰虧虛大鼠的焦慮行 為及心陰虧虛表現(xiàn)均有明顯改善作用。故從‘‘方證相關(guān)， 以方驗(yàn)證”的評價(jià)角度證實(shí)了本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷姆€(wěn)定性和可靠 性。同時(shí)，本研究結(jié)果也說明了天王補(bǔ)心丸在干預(yù)治療 GAD心陰虧虛大鼠時(shí)，主要通過增加大鼠海馬組織內(nèi)GR mRNA表達(dá)量以發(fā)揮抗焦慮作用。由此可知，病證方藥緊 密聯(lián)系，病證結(jié)合、方證相應(yīng)，天王補(bǔ)心丸切實(shí)地對GAD心 陰虧虛大鼠病證結(jié)合模型進(jìn)行了驗(yàn)證和評價(jià)。

5結(jié)論

本研究采用不確定性空瓶應(yīng)激法結(jié)合水環(huán)境小站臺(tái)睡 眠剝奪法構(gòu)建了 GAD心陰虧虛病證結(jié)合模型，并且從宏觀 表征、微觀指標(biāo)、以方驗(yàn)證（天王補(bǔ)心丸)3個(gè)角度對模型進(jìn) 行了評價(jià)。結(jié)果表明，模型穩(wěn)定、相對可控、造模理念符合 中醫(yī)病因bin機(jī)，值得推廣應(yīng)用。受實(shí)驗(yàn)條件限制，本模型的 微觀指標(biāo)相對較少，有待進(jìn)一步研究。