近年來，抗病毒的yao物在動物上的濫用現(xiàn)象頻繁發(fā)生，可直接導致病毒耐藥性的產(chǎn)生，嚴重影響藥物對人的治療作用，對人類健康構成了潛在威脅。

因此，我國農(nóng)業(yè)部明令禁止動物使用利巴韋林等抗病毒yao物，并且出臺了動物源食品中抗病毒yao物的檢測標準，切實保障動物源食品的安全。

大曹技術中心參考《出口動物源食品中利巴韋林殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（SN/T 4519-2016）標準，在LC-MS上建立了利巴韋林標準品的檢測方法。

SN/T 4519-2016 規(guī)定了色譜柱類型

那么問題來了？

什么是兩性離子型親水相互作用色譜柱？

跟一般的親水色譜柱有什么區(qū)別呢？

利巴韋林檢測為什么使用這款色譜柱？

01

兩性離子型親水相互作用色譜柱

兩性離子型親水相互作用色譜柱，是固定相鍵合了兩性離子的親水型色譜柱。

然而，目前市面上大多數(shù)的親水性色譜柱（HILIC），通常鍵合的中性或者非兩性的帶電基團，對極性化合物保留能力不夠，或容易產(chǎn)生靜電力吸附導致拖尾。

大阪曹達獨立研發(fā)的兩性離子型親水色譜柱——PC HILIC，鍵合為PC（磷酸膽堿）基團，它是構成細胞膜的成分，擁有高親水性和生體適應性。

PC HILIC 鍵合相結構

PC兩性離子鍵合相的優(yōu)勢：

1、形成穩(wěn)定的“富水層”，對極性物質(zhì)保留能力更好；

 2、兩性離子型鍵合相對化合物額外的靜電力吸附少，峰形更加尖銳；

 3、低濃度的緩沖鹽調(diào)節(jié)，即可實現(xiàn)分離效果的提升。

好了，話不多說，咱們來看看利巴韋林的檢測方法吧。如果您想了解更多PC HILIC & CAPCELL CORE PC的內(nèi)容，請直接閱讀文末內(nèi)容。

02

SN/T 4519-2016利巴韋林的分析方法

首先，使用核殼型高柱效兩性離子鍵合親水性相互作用色譜柱CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1mm i.d.×150mm，在5 mmol/L乙酸銨（0.2%甲酸）-乙腈條件下進行分析，結果如圖1所示，利巴韋林在HILIC模式下，能夠獲得良好保留與良好峰形，出峰時間為3.57min，總分析時間9.5min。

圖1 SN/T條件下LC-MS分析結果

HPLC Conditions

色譜柱：CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1mm i.d.×150mm

流動相：A:5mmol/L乙酸銨（0.2%甲酸） B:乙腈

           B% 95%(0min) ->95%(2min) ->70%(4min) ->40%(5min) ->95%(6min) ->95%(10min)

流  速：0.4mL/min

溫  度：30°C

檢  測：Qtrap 5500; ESI; Positive; MRM

進樣量：2 µL

濃  度：2 ng/mL（水溶后使用初始比例流動相稀釋）

03

利巴韋林的LC-MS快速分析方法

由于CAPCELL CORE PC色譜柱能夠?qū)晚f林得到良好保留結果，也可以使用更短色譜柱以獲得更快速的分析結果。我們重新優(yōu)化梯度后，得到結果如圖2所示，出峰時間縮短為0.83min，由于HILIC型色譜柱相對平衡較慢，因此設置2min后平衡時間，總體分析時間縮短為4min。

圖2 利巴韋林LC-MS快速分析結果

HPLC Conditions

色譜柱：CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1mm i.d.×50mm

流動相：A:5mmol/L乙酸銨（0.2%甲酸） B:乙腈

         B% 95%(0min) ->95%(0.5min) ->50%(2min) ->95%(2.1min) ->95%(4min)

流  速：0.5mL/min

溫  度：30°C

檢  測：Qtrap 5500; ESI; Positive; MRM

進樣量：2 µL

濃  度：2 ng/mL（水溶后使用初始比例流動相稀釋

綜上所述，使用CAPCELL CORE PC S2.7（兩性離子親水性相互作用）色譜柱能夠完成《出口動物源食品中利巴韋林殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（SN/T 4519-2016）中利巴韋林的良好保留與檢測，柱長可根據(jù)實際分析需要進行選擇。

PC HILIC & CAPCELL CORE PC

PC HILIC是在硅膠基材表面以PC基團進行修飾，實現(xiàn)了適用于HILIC色譜柱的超親水性填料的制造。與普通硅膠色譜柱相比，PC HILIC的親水性更強，對極性化合物核酸堿基的保留更強。

PC HILIC色譜柱 VS 其他公司HILIC色譜柱：在酸性條件下對極性化合物核酸堿基進行分析，因 PC HILIC 具有*親水性，對核酸堿基得到了良好保留，有利于分離。另外，理論塔板數(shù)也很高，峰形也很尖銳。

色譜柱：PC HILIC S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm

流動相：10 mmol/L HCOONH4 (pH 3.5) / CH3CN = 10 / 90
流　速：1.0 mL/min
溫　度：40℃
檢　測：UV 254 nm
樣　品：①萘 ②胸腺嘧啶 ③腺嘌呤 ④胞核嘧啶

CAPCELL CORE PC  VS  PC HILIC：出峰更快，具有核-殼型色譜柱柱效高的特點。

【液相條件】

流動相：10 mmol/L甲酸銨 / 乙腈 = 10 / 90

流　速：400 μL/min

溫　度：40℃

檢測器：UV 254 nm

進樣量：1 μL

樣　品：1. 胸腺嘧啶(5 ppm) 2. 尿嘧啶(5 ppm) 3. 腺嘌呤(5 ppm)  4. 胞嘧啶(5 ppm) 5. 鳥嘌呤(5 ppm)

因此，CAPCELL CORE PC S2.7是分析強親水性化合物的核-殼型HILIC色譜柱。