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CCK-8實(shí)驗(yàn)中常見問題及處理方法

來源:上海研謹(jǐn)生物科技有限公司   2020年09月17日 10:16  

CCK-8實(shí)驗(yàn)中常見問題及處理方法

 

常見問題FAQ

 

Q: CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖和毒性的優(yōu)點(diǎn)有哪些?

A: A: CCK- 8較傳統(tǒng)的MTT法優(yōu)點(diǎn)在于1) MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫還原酶還原成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液來溶解而CCK- 8產(chǎn)生的formazan都是水溶性的,可以省去后續(xù)的溶解步驟,2)

CCK-8檢測(cè)靈敏度更高,更加穩(wěn)定; 3)酚紅和血清對(duì)其測(cè)定無明顯影響; 4)不必去上清,不必洗,滌細(xì)胞更加簡(jiǎn)便; 5)對(duì)細(xì)胞無明顯毒性,加入顯色后,可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板使檢測(cè)時(shí)間更加靈活,而且不影響細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

 

Q :在做細(xì)胞的加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),藥物對(duì)CCK-8測(cè)定是否有影響?如何解決?

 

A: 1)注意如果藥物具有還原性(如維生素C),會(huì)和CCK-8發(fā)生顯色反應(yīng)增加吸光度。

2)藥物中的金屬對(duì)CCK-8顯色有影響:當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氧化鐵、硫酸銅會(huì)抑制5%,15%, 90%的顯色反應(yīng)使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10mM的話,將會(huì)100%抑制。解決辦法:首先要確認(rèn)藥物是否有吸收,在含有藥物的

培養(yǎng)基中加入CCK-8,測(cè)定450nm的吸光度如果它的吸光度比不含藥物的培養(yǎng)基(加CCK-8)的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加CCK-8之前更換培養(yǎng)基,去掉藥物的影響。

3) 由于培養(yǎng)基中可能含有氧化還原反應(yīng)的物質(zhì),在正式實(shí)驗(yàn)之前建議使用一個(gè)孔作-一 下檢測(cè),有必要先確認(rèn)培養(yǎng)基和CCK-8是否反應(yīng)。-般正常的0D值應(yīng)該在0.4以下。

 

Q: CCK-8如何設(shè)定空白對(duì)照?

A :在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8.培養(yǎng)-定的時(shí)間,測(cè)定450nm的吸光度即為空白對(duì)照。 在做加藥實(shí)驗(yàn)(細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn))時(shí),還應(yīng)考慮藥物的吸收可在不含細(xì)胞.加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8,培養(yǎng)-定的時(shí)間,測(cè)定450nm的吸光度作為空白對(duì)照。

 

 

Q: CCK-8對(duì)于不同的細(xì)胞,靈敏度是否-樣?

A:不一樣,懸浮細(xì)胞較貼壁細(xì)胞難染色。對(duì)于貼壁細(xì)胞,般加入CCK 8培養(yǎng)1-4小時(shí)吸光度已經(jīng)很高,但對(duì)于懸浮細(xì)胞則可能吸光度較低,可以通過延長(zhǎng)CCK-8的加入時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量來解決。

 

Q :可否采用CCK-8法進(jìn)行腫瘤細(xì)胞的基質(zhì)黏附實(shí)驗(yàn)?

A :可以,以層粘連蛋白(Ln)包被96孔板通過計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)孔板中貼壁細(xì)胞的數(shù)量反映細(xì)胞的黏附性。細(xì)胞的黏附性越強(qiáng),則單位時(shí)間內(nèi)貼于鋪有L n板底的細(xì)胞數(shù)量越多去除尚末貼壁的細(xì)胞后,應(yīng)用CCK-8等方法計(jì)量細(xì)胞數(shù)量便可間接反映不同細(xì)胞或不同處理的細(xì)胞黏附能力的差異。

 

Q :可否采用CCK-8法進(jìn)行藥物的IC50檢測(cè)?

A :可以,將細(xì)胞培養(yǎng)后按照不同濃度的藥物處理定時(shí)間后進(jìn)行CCK-8檢測(cè),根據(jù)吸光度繪制曲線,計(jì)算該藥物抑制細(xì)胞數(shù)量一半時(shí)的濃度(IC50)。

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 

WB代做

HE染色

免疫熒光染色

蛋白相互作用分析

ELISA免費(fèi)代檢測(cè)

免疫組化

熒光定量PCR

番紅O固綠染色

流式細(xì)胞檢測(cè)

激光共聚焦

透射電鏡服務(wù)

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

免疫共沉淀(Co-IP)

DNA甲基化

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA 測(cè)序

半定量RT-PCR

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

原位雜交(FIsh)

石蠟/冰凍切片

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP

CCK8檢測(cè)

蛋白雙向(2-D)電泳

蛋白雙向2D-WB

ATP/ADP檢測(cè)

Taqman探針

細(xì)胞劃痕

基因組DNA提取

 

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